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专利号: 2018109038303
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-05-06
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)用水将鱼皮清洗干净后剪片、脱脂待用;

(2)将脱脂后的鱼皮置于低浓度碱液中浸泡,然后用水洗至中性后冷冻备用;

(3)将步骤(2)处理后鱼皮置于水中,加酸液调节pH值2.0~4.6得浸泡液,向浸泡液中加鱼皮质量1%~5%的还原胺化试剂搅拌处理3~5小时,过滤鱼皮并冲洗至中性后冷冻备用;

(4)向步骤(3)处理后的鱼皮加入30~50倍质量的水后匀浆,加热至水温50~60℃后加入蛋白提取酶处理,然后加热灭酶活性后离心分离,所得上清液为鱼皮蛋白原液;

(5)向鱼皮蛋白原液中加入蛋白分解酶处理,然后加热灭酶活后离心分离得到酶解液;

(6)真空冷冻干燥酶解液得到鱼皮免疫调节肽干粉;

所述步骤(2)中所述低浓度碱液为质量浓度2~5wt%的氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液,浸泡温度25~30℃,浸泡时间12~24h;

所述步骤(3)中所用酸溶液为酒石酸与醋酸、柠檬酸或苹果酸的混合溶液;

步骤(3)中浸泡液的温度≤38℃;

所述步骤(3)还包括在搅拌的过程中向浸泡液施加低压脉冲电场,低压脉冲电场的电压为60~100V,频率为20~25Hz;

所述蛋白提取酶的酶活力为7000~10000U/g,处理时间10~16h;

步骤(5)中蛋白分解酶为中性蛋白酶和金属蛋白酶的混合物,两者质量比为1:0.2~

0.5,分解温度为40~50℃。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)脱脂过程如下:向鱼皮中加水,加入鱼皮质量0.2~0.6wt%的番茄红素与维生素C混合物,维生素C与番茄红素质量比为1:0.1~0.2,然后加脂肪酶30~40℃一次脱脂2~4h,脂肪酶活力为30000~50000U/g,冲洗鱼皮至无番茄红素色后置于20~30wt%异丙醇溶液二次脱脂2~4h,冲洗鱼皮至无异丙醇味。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中酸溶液中,酒石酸的质量百分比为50wt%~70wt%。

4.根据权利要求1或3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中调节的浸泡液的pH值为2.8~4.0。

5.根据权利要求1或3所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所用还原胺化试剂为硼氢化锌、硼氢化钠、醋酸硼氢化钠或氰代硼氢化钠中的一种。

6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中的蛋白提取酶为木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、曲霉菌丝氨酸蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或多种。

7.根据权利要求1或6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中分解时间3~5h。

8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述金属蛋白酶为多粘芽孢杆菌产生的中性金属蛋白酶。