1.一种高效提取植物基因组DNA的无毒提取液组合GPR.1,其组成如下:溶液GPR.1A:2~3.5% PEG8000,0.5M NaCl,0.1 M Tris‑HCl,0.05 M EDTA, 2~4%PVPP临用前加入,余量为双蒸水;其中2~4% PVPP是质量体积比;
溶液GPR.1D:18~20%PEG8000,3.3~3.6 M NaCl,余量为双蒸水;
溶液GNR.1E:50 mM Tris‑HCl,10 mM EDTA,2.5 M NaCl,余量为双蒸水;
还包括:
20mg/mL蛋白酶K,使用时单独加入;
20% SDS,使用时单独加入;
5 M乙酸钾溶液,使用时单独加入。
2.如权利要求1所述的一种高效提取植物基因组DNA的无毒提取液组合GPR.1,其特征在于,所述Tris‑HCl是pH 8.0的Tris‑HCl溶液。
3.如权利要求1所述的一种高效提取植物基因组DNA的无毒提取液组合GPR.1,其特征在于,所述EDTA是pH 8.0的EDTA溶液。
4.权利要求1或2或3所述的无毒提取液组合GPR.1应用于提取植物基因组DNA的用途。
5.一种基于权利要求1或2或3所述的无毒提取液组合GPR.1提取植物基因组DNA的方法,其特征在于:利用GPR.1A与蛋白酶K结合的SDS抽提缓冲液在65 ℃下裂解植物细胞,使染色体离析,蛋白质变性,释放出核酸;加入乙酸钾去除大部分蛋白质和多糖的沉淀后,采用GPR.1D和乙醇/GNR.1E连续两次沉淀DNA,去除多糖类、多酚类杂质,得到大量高纯度的DNA。
6.如权利要求5所述的提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,在第二次沉淀DNA之前加入少量RNase A,去除RNA影响。
7.如权利要求6所述的提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取植物叶片,于液氮中研磨成细粉,迅速转入2 mL离心管中,按每150mg±50mg植物叶片加入1000 μL溶液GPR.1A,剧烈摇匀;再加入65μL 20%SDS与5~6 μL 20mg/mL蛋白酶K贮液,轻缓颠倒摇匀;65℃保温30 min,不时轻缓颠倒摇匀;
(2)加入离心管三分之一体积的5 M乙酸钾溶液,65℃保温1 min,立即轻缓颠倒摇匀;4℃或冰上静置20 min; 4℃,20000×g,离心20 min,完成后置冰上;
(3)取上清液约1000 μL,转入装有二分之一体积的溶液GPR.1D的1.5 mL离心管中,轻缓颠倒摇晃30次以上直至混匀,4℃静置25 min;4℃,4000~5000×g,离心15 min,弃上清;
短暂离心,用吸头轻缓吸尽残留液体;
(4)加入0.1×TE,pH 8.0200 μL和10 mg/mL RNase A贮液2 μL,轻缓摇晃至沉淀完全消失,65℃保温15 min;加入300 μL的溶液GPR.1E,混匀;4℃,20000×g,离心10 min,完成后置冰上;
(5)取上清液450 μL,转入装有1000 μL ‑20℃预冷的无水乙醇的1.5 mL离心管中,仔细混匀,4℃静置20 min;4℃,13000~14000 g,离心10 min,弃上清;
(6)加入70%乙醇1000 μL,轻缓颠倒摇匀几次,4℃,13000~14000 g,离心5 min,弃上清;短暂离心,吸尽残留液体;加入30 μL的0.1×TE,pH 8.0溶液,轻弹至DNA沉淀完全消失,
65℃保温15 min,‑20℃贮存备用。