1.以二乙基膦酰基乙酸为模板分子合成的多识别位点Fe3O4@SiO2@MIP作为仿生抗体在同时检测多种有机磷农药残留中的应用;
所述Fe3O4@SiO2@MIP由如下方法制备而成:将1mmol二乙基膦酰基乙酸溶解在四氢呋喃中,加入1 3mmol 3‑氨丙基三乙氧基硅烷,~
搅拌反应;再加入40.00~80.00 mg Fe3O4@SiO2和4~8 mmol正硅酸乙酯,搅拌反应;当0.2~
0.5mL氢氧化铵加入后,将混合液在50 70℃下放置8 12 h,用甲醇过滤和洗涤,除去未反应~ ~
试剂和模板分子,干燥,用120 150 mL甲醇‑乙酸混合溶剂处理12 24 h,再用120 150 ml甲~ ~ ~
醇处理,干燥,即得;
所述多种有机磷农药为甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫。
2.一种基于量子点标记仿生荧光免疫分析同时检测多种有机磷农药的方法,其特征在于,包括以下步骤:
以含有有机磷农药公共基团的二乙基膦酰基乙酸为模板分子合成的多识别位点Fe3O4@SiO2@MIP作为仿生抗体;以同一激发波长下的不同发射波长的量子点作为标记物,对所检测的有机磷农药的半抗原进行标记;
将不同发射波长量子点标记的半抗原和所检测的有机磷农药混合标准品混合,加入Fe3O4@SiO2@MIP,反应,离心,测定上清液的荧光值,根据荧光值计算不同发射波长下的抑制率,建立所检测的多种有机磷农药的标准曲线,利用标准曲线对待测物中有机磷农药的含量进行测定;
所述多种有机磷农药为甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫。
3.一种基于量子点标记仿生荧光免疫分析同时检测甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)以二乙基膦酰基乙酸作为模板分子,制备得到Fe3O4@SiO2@MIP;
(2)以三种具有不同发射波长的CdSe/ZnS量子点分别对甲基对硫磷半抗原、毒死蜱半抗原和敌百虫半抗原进行标记,得到三种量子点标记半抗原;
(3)将步骤(2)制备的三种量子点标记半抗原和系列浓度的甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫混合标准溶液混合,然后加入Fe3O4@SiO2@MIP,反应,离心,测定上清液的荧光值,根据荧光值计算不同发射波长下的抑制率,建立甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫三种农药的标准曲线,利用标准曲线对待测物中甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫的含量进行测定;
步骤(2)中,对甲基对硫磷半抗原、毒死蜱半抗原和敌百虫半抗原进行量子点标记的具体方法为:
分别将甲基对硫磷、毒死蜱、敌百虫半抗原与1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺和三种不同发射波长的CdSe/ZnS量子点按照200:4000:1 5的摩尔比例加入到反应容器中,~
充分混匀;加入50 100 μL pH 7.4的硼酸盐缓冲液,避光室温反应2 10 h;反应结束后,离~ ~
心除团聚,并将反应物超滤浓缩进行分离纯化;
步骤(3)中,三种不同发射波长量子点标记的半抗原、甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫混合标准溶液、Fe3O4@SiO2@MIP加入量的比为(1~5)mL:(3~15)mL:(5.00~15.00)mg。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述CdSe/ZnS量子点的发射波长分别为525 nm、585 nm和625 nm。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述反应的条件为:室温下振荡30‑180 min。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,离心的转速为8000r/min,离心时间为15min。
7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,还包括:对待测物进行提取的步骤;所述对待测物进行提取包括:将待测物用甲醇‑水溶液进行超声提取,过滤;待测物与甲醇‑水溶液加入量的比为5 g:(5 15)mL,所述甲醇‑水溶液中甲醇与水的体积比为3:17。
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