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专利号: 2018105610488
申请人: 华侨大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测全基因组的单链DNA损伤的方法,它包括如下步骤:

1)使用交联剂进行交联以捕获内源性的单链断裂;

2)把染色质碎片化,使3’-OH缺失的片段无法用TdT加尾;

3)经过核酸酶灭活后,细胞核进一步进行蛋白酶K处理以及交联逆转,分离获得基因组DNA;

4)对纯化后的核酸片段进行加尾,加尾后的基因组DNA直接用于SMS;采用三代测序仪平台测序,获得单链DNA损伤位点。

2.根据权利要求1所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:步骤1)中,所述的交联剂包括甲醛。

3.根据权利要求2所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:步骤1)中,采用的甲醛的浓度范围为0.5%-2%。

4.根据权利要求1或2所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:步骤1)中,交联时间为5-15min。

5.根据权利要求1所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:碎片化采用核酸酶。

6.根据权利要求5所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:步骤5)中,所用的核酸酶为MNase。

7.根据权利要求5或6所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于,步骤2)中,核酸酶处理直接在交联细胞分离出的细胞核上进行,直到大部分的基因组DNA在150-500个碱基对范围内。

8.根据权利要求1所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:步骤3)中,交联逆转,使得蛋白和DNA分离,并去除里面的RNA。

9.根据权利要求1所述的一种检测全基因组的SSBs的方法,其特征在于:步骤4)中,首先,通过上述Helisphere程序包,过滤出长度≥25碱基的高测序质量的SMS reads;第二,剩余的数据通过indexDPgenomic软件比对到GRCh37/hg19人类基因组;唯一比对或者多位点比对结果的reads将被保留;

第三,比对至参考基因组中富含PolyA的Reads被去除;由单链比对结果推断对应损伤链的序列,SSB单链富集polyA区域由单链富集polyT区域体现;5’上游序列20碱基中T’部分的比对结果>40%从后续分析中去除。