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专利号: 2018105029818
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:包括,

上转换发光纳米材料的制备及改性:将含有Yb3+、Y3+、Er3+的无机盐加入油酸、十八烯混合、搅拌并通入惰性气体,加热,形成均一溶液;将氟化铵、氢氧化钠溶于甲醇后加入上述溶液中,加热蒸发除去甲醇,通入惰性气体进行反应,加入冷凝回流装置、升温进行反应,得到上转换发光纳米材料;将聚丙烯酸、乙醇混合,将所述上转换发光纳米材料分散于氯仿溶液后加入到聚丙烯酸、乙醇混合溶液中,搅拌反应,得到改性的上转换发光纳米材料;

制备上转换适配体探针:将所述改性的上转换发光纳米材料与适配体偶联,制备上转换适配体探针;

适配体互补序列在试纸条硝酸纤维素膜上的固定:将适配体识别序列与非识别序列的互补序列DNAOTA和DNApoly A通过链霉亲和素固定在硝酸纤维素膜的检测线及质控线上。

2.如权利要求1所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:所述上转换发光纳米材料中,Y3+含量为78%、Yb3+含量为20%、Er3+含量为2%,以体积比计,所述油酸:十八烯=2:5。

3.如权利要求1或2所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:所述上转换发光纳米材料改性,包括,将YbCl3·6H2O、YCl3·6H2O和ErCl3加入6mL油酸和15mL十八烯,在搅拌、通氮气环境下,逐渐升温至160℃,使试剂形成均一的溶液,自然冷却至室温,称取4mmol NH4F和2.5mmol NaOH溶于10mL甲醇溶液中,将上述溶液逐滴加入到三口烧瓶中,升温至60℃磁力搅拌30min,后逐渐升温蒸发去除甲醇;持续通氩气,加入冷凝回流装置,升温至300℃,持续反应1h,反应结束后,关闭装置,自然冷却至室温,用水和乙醇将材料离心清洗三次,并于70℃下烘干8h,得到所述上转换发光纳米材料。

4.如权利要求3所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:所述上转换发光纳米材料改性,还包括,将200mg聚丙烯酸和8mL无水乙醇溶液搅拌均匀,将30mg所述上转换发光纳米材料分散于4mL氯仿溶液,并逐滴加入聚丙烯酸和无水乙醇溶液中,磁力搅拌反应24h后,离心收集材料,得到所述改性的上转换发光纳米材料。

5.如权利要求1、2或4任一所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:所述制备上转换适配体探针,包括将20mg所述改性的上转换发光纳米材料分散于4mL浓度为10mM的吗啡啉乙磺酸缓冲溶液中,超声分散后,加入0.2mL浓度为

5mg/mL N-羟基硫代琥珀酰亚胺和0.1mL 5mg/mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液,于37℃摇床中震荡2h进行羧基活化,离心洗涤后分散于2mL水溶液中,加入氨基化适配体,37℃下孵育24h,离心洗涤后分散于2mL水中,得到所述上转换适配体探针。

6.如权利要求1、2或4任一所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:所述适配体在试纸条硝酸纤维素膜上的固定,包括,取0.125mg/mL链霉亲和素100μL,分别加入100μM DNAOTA及DNApoly A,震荡混匀,并将混合液置于37℃摇床中孵育30min,用点晶喷膜仪将两种混合液分别喷涂于硝酸纤维素膜上,喷涂量为0.8μL/mL,两条线间距为0.5mm,将处理后的硝酸纤维素膜放于37℃烘箱中1h。

7.如权利要求7所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的制备方法,其特征在于:所述硝酸纤维素膜包括SartoriusCN140硝酸纤维素膜。

8.如权利要求1、2、4或7任一所述的用于赭曲霉毒素A快速检测的上转换适配体试纸条的 制备 方法 ,其特 征在于 :所 述适配 体序列 为A ptO TA  1 :5’-N H2 -TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAG GGAGCATCGGACA-3’;所述适配体识别序列与非 识别序列的互补序列DNAOTA ,其序列为5’-bio-TGTCCGATGCTCCCTTTACGCCACCCACACCCG ATC-3’,所述DNApolyA其序列为5′-bio-AAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAA-3′。