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专利号: 2018104187960
申请人: 安徽师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种双信号无酶的信号放大RNA纳米生物传感器的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:

1)将探针1 P-MB与DTT缓冲溶液混合均匀后,静置;然后加入乙酸溶液和乙酸钠溶液,再加入乙醇,混合,离心,除去上清液,干燥,即得处理后的探针1;

2)将步骤1)处理后的探针1用缓冲溶液溶解后,将金纳米线电极浸入探针1缓冲溶液中,孵育后,用巯基己醇封闭,得MB/NWE电极;

3)再将MB/NWE电极置于探针2 P-Fc缓冲溶液中,杂交,探针2与探针1通过碱基对的互补配对,得Fc/MB/NWE电极,即为双信号无酶的信号放大RNA纳米生物传感器。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)所述步骤1)探针1 P-MB序列:

5’-HS-SH-C6-TGG CAG CAC ATT GCC G-C6-MB-3’。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2)具体为:

将步骤1)处理后的探针1用0.01M的pH7.4的PBS缓冲溶液溶解,稀释到5uM;将金纳米线电极浸入探针1缓冲溶液中,恒温37℃下孵育8-12小时;然后室温下将电极浸入100uL浓度

10uM的巯基己醇溶液中,封闭2小时,得MB/NWE电极。

4.根据权利要求1或3所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中所述金纳米线电极的制备方法为:将直径25um的2cm金微米线装入长度8cm、内径0.64mm、外径1mm毛细管中央,在P-2000激光拉制仪下加热并水平拉断,在真空状态下,加热温度400-460℃,加热四个循环,每个循环加热15-25s,冷却35-45s,使得毛细管与金属丝熔融包裹严实;然后将加热温度设置为

400-460℃,拉力130-150N,速率45-55m/s,在该条件下拉断,之后使用钨丝连通导电,经过磨擦金面露出,即为金纳米盘电极,用氢氟酸刻蚀金纳米盘电极,获得金纳米线电极。

5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤3)具体为:

将MB/NWE电极置于含2uM探针2 P-Fc的0.01M PBS溶液中,恒温37℃下杂交8-12小时,探针2与探针1通过碱基对的互补配对,使探针1的颈环结构解开形成较稳定的双链结构阻碍亚甲基蓝的电子传递,得到Fc/MB/NWE电极。

6.根据权利要求1或5所述的制备方法,其特征在于,所述探针2 P-Fc序列:5’-CGC CAA TAT TTA CGT GCT GCT A-C6-Fc-3’。

7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,还包括步骤4):将该生物传感器与miRNA-16杂交,验证该传感器对目标RNA的特异性灵敏响应。

8.一种权利要求1-7任一项所述制备方法制备得到的双信号无酶的信号放大RNA纳米生物传感器。

9.一种权利要求1-8任一项所述制备方法制备得到的双信号无酶的信号放大RNA纳米生物传感器检测miRNA-16的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,检测方法为:

将制备的双信号无酶的信号放大RNA纳米生物传感器与不同浓度的miRNA-16杂交,杂交后的电极在含有5mM MgCl2和140mM NaCl的0.01M PBS中处理后,检测SWV响应,构建杂交前后MB和Fc峰电流变化值之和与miRNA-16的浓度的对数的线性关系,实现对miRNA-16的检测。