1.一种双氰基二苯代乙烯型双光子荧光溶剂生色水溶性探针VP,其特征在于:所述双光子荧光溶剂生色水溶性探针具有以下分子结构:。
2.一种如权利要求1所述的双氰基二苯代乙烯型双光子荧光溶剂生色水溶性探针VP的合成方法,其特征在于:合成路线如下所示:。
3.根据权利要求2所述的合成方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)中间体9的合成:将中间体8置于圆底单口烧瓶中,再加入THF和NaH,抽真空充氩气保护,于冰水浴下边搅拌边滴加中间体5即1,4-二氰基-2- 甲基-5-(二乙基磷酰基甲基)苯的THF溶液;滴加完后再于冰水浴下反应1-2h,撤去冰水浴于室温下反应12-15h,并于室温下继续反应一夜;旋干,用10mlCH2Cl2洗提3-4次,然后用10ml的H2O洗涤2-3次,加无水Na2SO4干燥,过滤、旋干、烘干待用;
(2)目标化合物VP的合成:步骤(1)获得的中间体9的粗品和10%的Na2CO3,加入10ml乙醇中,在50-60℃下搅拌反应1.5-2.5h,反应完毕后加入1mol·L-1盐酸5mL,15-20ml乙酸乙酯萃取3-4次,无水硫酸钠干燥,过滤,真空脱去溶剂,粗品柱色谱分离,先用V(丙酮):V(二氯甲烷)=2:3洗脱,分离完成后丙酮重结晶,即得黄色粉末VP。
4.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于:所述步骤(1)中,中间体8、THF、NaH的摩尔体积比为中间体8:THF:NaH=1.7mmol:1ml:1.8mmol,中间体8、中间体5和THF的摩尔体积比为中间体8:中间体5:THF=5mmol:5mmol:9ml。
5.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于:所述步骤(2)中,中间体9和碳酸钠的质量体积比为中间体9:碳酸钠=80:1。
6.根据权利要求1所述的双氰基二苯代乙烯型双光子荧光溶剂生色水溶性探针VP或如权利要求2-5所述的合成方法得到的探针VP应用于细胞内粘度的测定、细胞粘度变化监测。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:所述的细胞为成纤维细胞。
8.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:所述的双光子荧光溶剂生色水溶性探针,其应用方法是:将VP溶于生理盐水中,采用HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲溶液调节pH,在培养小鼠成纤维细胞后的培养基中加入1μmol·L-1荧光探针分子VP,并在30-40℃、含2-
10%CO2的细胞培养箱中孵育0.5-2h,取出细胞并用缓冲溶液PBS冲洗3-4次,洗去多余的VP,然后用共聚焦激光扫描显微镜(λex=800nm,~1.5W)将射入的激光共聚焦于细胞上,收集600~650nm通道的荧光,由此获得细胞内粘度区域分布和粘度高低信息,实现对细胞粘度的检测和变化情况监测。