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专利号: 2018101481242
申请人: 淄博职业学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酶活力提高的羧甲基纤维素酶突变体,其特征在于,所述突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的来源于哈茨木霉的羧甲基纤维素酶蛋白质内部氨基酸进行定点突变,将第31位缬氨酸替换为谷氨酸,和/或将第135位甲硫氨酸替换为赖氨酸。

2.表达权利要求1所述羧甲基纤维素酶突变体的细胞系。

3.一种重组大肠杆菌,其特征在于,以pET-22b(+)为载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,表达所述突变体。

4.一种酶活提高的重组大肠杆菌的构建方法,其特征在于,所述方法是将含有编码所述羧甲基纤维素酶突变体的基因与表达载体连接后转化至大肠杆菌中。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,以pET-22b(+)为载体、以E.coli BL21(DE3)为宿主表达权利要求1所述羧甲基纤维素酶突变体。

6.一种提高羧甲基纤维素酶活力的方法,其特征在于,将第31位缬氨酸替换为谷氨酸,并将第135位甲硫氨酸替换为赖氨酸。

7.一种生产羧甲基纤维素酶的方法,其特征在于,是将权利要求3所述的重组大肠杆菌接种至TB培养基中,35~37℃培养12~30h。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述接种量按体积比为1~3%;所述菌体至OD600为0.6~0.8时,加入IPTG诱导。

9.权利要求1所述羧甲基纤维素酶突变体在食品、化工领域的应用。

10.权利要求3所述重组大肠杆菌在降解纤维素方面的应用。