1.一种制备L-天冬氨酸的方法,其特征在于,以偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株为催化剂,以马来酸为底物,生成L-天冬氨酸,所述偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株,是以大肠杆菌为宿主,表达以pRSFDuet-1为表达载体构建的重组表达载体pRSFDuet-1-maiA-aspA,所述马来酸顺反异构酶maiA在L-天冬氨酸裂解酶aspA上游;所述编码L-天冬氨酸裂解酶的基因的RBS序列替换为SEQ ID NO.25所示的序列,所述大肠杆菌是敲除了基因组中fum A-fum C基因的E.coli BL21(DE3)△fumAC,编码所述马来酸顺反异构酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,编码所述L-天冬氨酸裂解酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的一种制备L-天冬氨酸的方法,其特征在于,马来酸顺反异构酶来源于粘质沙雷氏菌,L-天冬氨酸裂解酶来源于大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述的一种制备L-天冬氨酸的方法,其特征在于,编码所述马来酸顺反异构酶的基因的核苷酸序列还进一步包括编码第27位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子并且编码第171位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子,或者编码第27位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子并且编码第104位的赖氨酸的密码子突变为编码精氨酸的密码子。
4.根据权利要求1所述的一种制备L-天冬氨酸的方法,其特征在于,以pH 8.0的2M的马来酸溶液为底物,加入重组菌株菌体浓度OD600为40的静息细胞悬液,静息细胞悬液与底物溶液的体积比为2:8。
5.一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株,其特征在于,以敲除了基因组中fum A-fum C基因的E.coli BL21(DE3)△fumAC的大肠杆菌为宿主,表达以pRSFDuet-1为表达载体构建的重组表达载体pRSFDuet-1-maiA-aspA,所述马来酸顺反异构酶maiA在L-天冬氨酸裂解酶aspA上游;编码L-天冬氨酸裂解酶的基因的RBS序列替换为SEQ ID NO.25所示的序列,编码所述马来酸顺反异构酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,编码所述L-天冬氨酸裂解酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
6.根据权利要求5所述的一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株,其特征在于,编码所述马来酸顺反异构酶的基因的核苷酸序列还进一步包括编码第
27位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子并且编码第171位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子,或者编码第27位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子并且编码第104位的赖氨酸的密码子突变为编码精氨酸的密码子。