1.一种双功能离子螯合磁性载体的制备方法,其特征在于:
1)Fe3O4纳米颗粒的制备:按照三价铁、二价铁1.75:1的比例,分别加入35 mL 0.5 mol/L的FeCl3和20 mL 0.5 mol/L的FeCl2溶液于烧杯中,搅拌混匀,置于50℃水浴中,快速滴入
2 mol/L的氨水溶液调节溶液酸碱度到pH 10.0±0.2,升温至80℃恒温保持1 h,然后用ddH2O洗涤数次,强磁铁吸附,弃去上清液,最后将磁流体保存于4℃ddH2O中备用;
2)磁性可得然微球的制备:油相:三颈瓶中加入36 mL甲苯、14 mL三氯甲烷混匀,加入
0.5 mL Span-80混匀,快速搅拌,预热至55℃;水相:将6%可得然胶加热溶于上述获得12.5 mL磁流体中,超声扩散,采用反向包埋法迅速转移至油相中,快速搅拌,使可得然胶在油相中分散均匀,55℃搅拌10 min,冰浴冷却,乙醚、丙酮、10%乙醇清洗三次,ddH2O大量冲洗,真空干燥;
3)磁性可得然微球的环氧化处理:取5 g上述获得磁性可得然微球分散于25 mL 2 mol/L NaOH溶液中含有NaBH4 2 mg/mL, 1 mL环氧氯丙烷于37℃摇床中振荡,陆续滴加 5 mL NaOH 和3 mL环氧氯丙烷,37℃摇床活化24 h,反应结束后,用ddH2O冲洗微球,于ddH2O中浸泡12 h;
4)磁性可得然微球的IDA化:将充分洗涤过的微球加入到 2 mol/L,15 mL Na2CO3溶液中,加入1 g IDA,于37℃摇床中振荡至24 h反应结束后,用ddH2O冲洗,浸泡过夜,载体保存于4℃ ddH2O中备用;
5)金属离子的螯合:取IDA化的磁性可得然微球,在此基础上经guanidine-HCl,acetic acid、水、SDS、EDTA处理后,加入一定量的金属钙离子溶液,室温下振荡, 随后以ddH2O洗涤, 即得目标载体。
2.一种固定化木聚糖酶的制备方法,其特征在于:利用权利要求1当中方法制备的双功能离子螯合磁性载体与木聚糖酶混合即实现对木聚糖酶的固定,所述双功能载体为磁性可得然微球经活化、螯合,得到具有固定化、纯化功能的双功能离子螯合磁性载体;其中,磁性可得然微球为以Fe3O4纳米颗粒为内核,可得然胶反向包埋为外壳,所述磁性可得然微球以环氧氯丙烷为活化剂活化,IDA为螯合配基螯合,再与离子进行螯合,得双功能载体;
所述的木聚糖酶来自土壤宏基因组库,所述的宏基因组中木聚糖酶基因序列为SEQ ID No:1;
其中固定化木聚糖酶的参数为,双功能离子螯合磁性载体的金属离子为钙离子,且添加量为6x10-2 mol/L,双功能离子螯合磁性载体的固定化时间为4h,双功能离子螯合磁性载体的给酶量为2.4mg/ml,双功能离子螯合磁性载体的固定化pH为5。