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专利号: 2017108880770
申请人: 河南工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种大豆种子基因组DNA的提取方法,所述提取方法包括细胞裂解过程以及纯化DNA的过程,其特征在于:

所述细胞裂解过程为:将获取的大豆种子细粉与细胞裂解液混匀,其中,每1ml细胞裂解液混合0.08~0.1g大豆种子细粉,然后置于55~65℃水浴至少60分钟,然后离心取上清液;

所述细胞裂解液为0.02g/ml的SDS,0.05mol/L的Tris‑HCl,0.05mol/L的EDTA,以及

0.15mol/L的NaCl的纯水溶液;所述细胞裂解液的pH值为8;

所述的纯化DNA的过程包括以下步骤:步骤1,取所述细胞裂解获得的上清液,向其中加入等体积的氯仿和异戊醇的混合液,所述氯仿和异戊醇的混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1,充分混匀后离心取上清液;

步骤2,向步骤1获得上清液加入等体积的所述氯仿和异戊醇的混合液,充分混匀后离心取上清液;

步骤3,向步骤2获得的上清液加入2.5倍体积的无水乙醇,于‑20℃静置后离心,弃上清,取沉淀;

步骤4,向步骤3的沉淀加入70%的乙醇洗涤,离心弃上清,取沉淀,重复洗涤一次,晾干;

步骤5,向步骤4获得的沉淀加入TE溶液溶解沉淀,再加入RNA酶,混匀,37℃培育30分钟;

步骤6,向步骤5获得的混合液中加入等体积的氯仿和异戊醇的混合液,所述氯仿和异戊醇的混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1,充分混匀后离心取上清液;

步骤7,向步骤6所获得的上清液中加入2.5倍体积的无水乙醇,于‑20℃静置后离心,弃上清,取沉淀;

步骤8,向步骤7的沉淀加入70%的乙醇洗涤,离心弃上清,取沉淀,重复洗涤一次,晾干;

步骤9,向步骤8获得的沉淀加入TE溶液溶解沉淀,‑20℃保存。

2.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于:所述大豆种子细粉为通过80目筛的细粉。

3.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于:在所述步骤1、步骤2和步骤6中,所述离心的条件为12000~14000转/分钟,常温下离心

10‑20分钟。

4.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于:在所述步骤4和步骤8中,所述离心的条件为10000~12000转/分钟,4℃下离心5‑10分钟。

5.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于:在所述步骤3和步骤7中,加入无水乙醇后,于‑20℃静置30分钟以上,再在4℃下,

12000‑16000转/分钟离心10‑20分钟。