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专利号: 2017108835648
申请人: 南通大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-04-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产虫草素的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:制备蛹虫草原生质体硅质体:称取质量比为0.1 0.2:1 3的有机-无机复合脂~ ~质与蛹虫草原生质体;将有机-无机复合脂质溶于三氯甲烷中,蒸发除去三氯甲烷得到类脂质薄膜;蛹虫草原生质体悬浮于甘露醇水溶液中,然后加入到所得类脂质薄膜中,搅拌混匀并迅速加热到45 50℃,热激10 30 s同时水浴超声,冷却至4℃后静置,经脂质体挤出器挤~ ~出,得到蛹虫草原生质体硅质体悬液;

步骤二:制备纳米纤维膜:取壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯溶解于乙酸水溶液中,加入甘油,再加入步骤一制得的蛹虫草原生质体硅质体悬液,搅拌混匀,通过静电纺丝制得纳米纤维膜,将其成卷填入层析柱中,层析柱中心留空;

步骤三:配制葡萄糖、核糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉和腺嘌呤的混合水溶液,经过滤除菌后,流经步骤二制备的层析柱,收集流出液,即得;

步骤一中,所述蛹虫草原生质体通过如下步骤获得:步骤a:取蛹虫草菌体用无菌水洗涤,离心取沉淀;

步骤b:配制酶解液:分别取步骤a沉淀质量2 4%的溶壁酶、蜗牛酶、纤维素酶和崩溃酶,~以质量体积比0.1:5 10g/mL加入到含有0.3 0.5 mol/L KCl和0.2 0.4 mol/L MgSO4的水~ ~ ~溶液中,搅拌溶解,再经过滤除菌,制得酶解液;

步骤c:将步骤a得到的沉淀加入到步骤b得到的酶解液中,涡旋混匀,25 30℃下水浴酶~解3 8 h后,离心取沉淀即得蛹虫草原生质体;

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步骤一中,所述有机-无机复合脂质的结构式如下:;

步骤一中所述有机-无机复合脂质与三氯甲烷混合的质量体积比为100 200:10mg/mL;

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所述甘露醇水溶液的浓度为100 180 g/L,蛹虫草原生质体与甘露醇水溶液混合的质量体~积比为1 3:10g/mL;

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步骤一中,所述脂质体挤出器采用聚碳酸酯滤膜,滤膜的孔径为0.5 1.0 μm。

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2.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤二中,所述壳聚糖的粘均分子量为5.0×105,脱乙酰度为80 85%;所述聚乙烯醇重均分子量为180000~200000;所~述聚氧化乙烯重均分子量为1×106~1×107;所述乙酸水溶液体积浓度为1 2%;所述壳聚~糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯的质量比为1 2:2 4:7 9,以总的质量浓度1.5 2%溶解于乙酸水~ ~ ~ ~溶液中。

3.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤二中,所述甘油的加入量与乙酸水溶液的质量体积比为1 2 g/L;所述蛹虫草原生质体硅质体悬液的加入量与乙~酸水溶液的体积比为1:100 500。

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4.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤二中,所述静电纺丝的接收装置采用铝箔,喷头到接收装置的距离为5 30 cm,电压为3 30 KV,喷射流量为1 5 ~ ~ ~mL/h。

5.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤三中,所述混合水溶液中葡萄糖浓度为10 15 g/L,核糖浓度为20 30 g/L,磷酸二氢钾浓度为0.5 1 g/L,硫酸镁~ ~ ~浓度为0.5 0.8 g/L,酵母粉浓度为5 8 g/L,腺嘌呤浓度为4 8 g/L;所述混合水溶液的pH~ ~ ~值调至5.0 5.8。

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6.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤三中,所述混合水溶液的流速为0.2 0.5 mL/h;层析柱中无菌空气的通气量为1.0 2.0 V/V·min,层析柱夹套温~ ~度控制在25 27℃。

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