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专利号: 2017108435151
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,包括以下步骤:

(1)将选取的海洋冷杆菌菌株的菌种接种到固体培养基上培养,加入无菌水制成菌种液;

(2)将菌种液接种到液体培养基中发酵培养制成发酵菌液;

(3)将发酵菌液透析去除部分培养基成份后离心得上清液,再加入乙醇静置沉降、离心分离得粗提产物;

(4)将粗提产物溶于水中得到粗产品溶液,加入乙醇静置沉降,然后离心分离沉降物并干燥得到精提产物;

(5)将精提产物溶于琼脂与淀粉的混合水溶液中,再冷却凝固制成重金属吸附剂;

所述的海洋冷杆菌菌株为Psychrobacter sp. GHF2,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:中国,北京,中国科学院微生物研究所;保藏日期:2017 年8 月9 日;保藏编号CGMCC No. :14509;

所述的海洋冷杆菌菌株Psychrobacter sp. GHF2 的16S rDNA 全序列为:

acttaggaat ctacctagta gtgggggata gcacggggaa actcgtatta ataccgcata cgacctacgg gagaaagggg gcagtttact gctctcgcta ttagatgagc ctaagtcgga ttagctagat ggtggggtaa aggcctacca tggcgacgat ctgtagctgg tctgagagga tgatcagcca caccgggact gagacacggc ccggactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggggaaa ccctgatcca gccatgccgc gtgtgtgaag aaggcctttt ggttgtaaag cactttaagc agtgaagaag actccgtggt taatacccac ggacgatgac attagctgca gaataagcac cggctaactc tgtgccagca gccgcggtaa tacagagggt gcaagcgtta atcggaatta ctgggcgtaa agcgagcgta ggtggcttga taagtcagat gtgaaatccc cgggcttaac ctgggaactg catctgaaac tgttaggcta gagtaggtga gagggaagta gaatttcagg tgtagcggtg aaatgcgtag agatctgaag gaataccgat ggcgaaggca gcttcctggc atcatactga cactgaggct cgaaagcgtg ggtagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgtc tactagtcgt tgggtccctt gaggacttag tgacgcagct aacgcaataa gtagaccgcc tggggagtac ggccgcaagg ttaaaactca aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg atgcaacgcg aagaacctta cctggtcttg acatatctag aatcctgcag agatgcggga gtgccttcgg gaattagaat acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgtcctta gttaccagcg ggttaagccg ggaactctaa ggatactgcc agtgacaaac tggaggaagg cggggacgac gtcaagtcat catggccctt acgaccaggg ctacacacgt gctacaatgg taggtacaga gggcagctac acagcgatgt gatgcgaatc tcaaaaagcc tatcgtagtc cagattggag tctgcaactc gactccatga agtaggaatc gctagtaatc gcggatcaga atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc。

2.根据权利要求1 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,1kg的液体培养基的组份如下:蛤肉汤30~50 g、蛋白胨2~3 g、磷酸氢二钾0.6~1.8 g、硫代硫酸钠0.3~0.7 g、柠檬酸铁铵0.5~1.1 g 和葡萄糖20~30 g,余量为陈化海水,固体培养基为向1 kg 液体培养基中加入15~20 g 的琼脂凝固制成的斜面培养基;

所述陈化海水为取新鲜海水在 23 ℃静置沉降 7 天后所得的海水的上清液。

3.根据权利要求1 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,步骤(1)中培养温度为18~23℃、时间36~48 小时,无菌水与固体培养基体积比为1.0~1.5:1。

4.根据权利要求1 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,步骤(2)中菌种液接种浓度为0.8~1.4 mL 菌种液/100 mL 液体培养基,发酵培养温度为18~23 ℃、时间3~5 天,摇床转速为160~200 r/min。

5.根据权利要求1 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,其特征在于,步骤(3)中发酵菌液透析去除部分培养基成份的过程如下:将发酵菌液置于旋转蒸发仪上,在60~65℃下减压浓缩至原体积的10%~15%,然后装入截留分子量为

8000 道尔顿的透析袋中用去离子水透析,至透析袋外侧的去离子水无色无味。

6.根据权利要求1 或5 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,步骤(3)中乙醇与上清液的体积比为2~4:1,1~5 ℃静置6~10 小时,离心速率为

6000~8000 r/min。

7.根据权利要求1 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,步骤(4)中的乙醇与粗产品溶液体积比2~4:1,1~5 ℃静置6~10 小时,离心速率6000~8000 r/min,干燥温度为90~105 ℃、时间为1~2 小时。

8.根据权利要求1 所述的利用海洋冷杆菌属菌株制备重金属吸附剂的方法,其特征在于,步骤(5)中向琼脂与淀粉的混合物中加入水并加热溶解,琼脂质量百分浓度为2%~5%,琼脂与淀粉的重量比为1.2~2:1,然后加入精提产物溶解均匀,将混合液降温凝固,在60~

80℃干燥90~120 分钟得到重金属吸附剂,琼脂与精提产物的重量比为1:1.2~1.8。