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专利号: 2017106301646
申请人: 李华政
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,包括如下步骤:在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中,施加浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯,以促进罗汉果UGT72B21基因的表达。

2.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,所述罗汉果组培过程中,将所述茉莉酸甲酯添加到所述罗汉果组培过程中的固体培养基中。

3.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,所述罗汉果栽培过程中,于罗汉果授粉后20~30天后,向罗汉果表面喷洒所述浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯至其表面滴水为止,每天于早上、中午和晚上各喷洒一次,连续喷施5天。

4.如权利要求2所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,所述罗汉果组培过程中所述固体培养基包含:MS,1.5mg/L 6-BA,0.3mg/L IBA,3.5g/L琼脂,30g/l蔗糖和1.0g/L活性炭。

5.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,所述罗汉果组培过程中的培养条件为:于相对湿度60-66%,光照强度1400lux,光照时间8h/d和温度21~25℃条件下培养30d。

6.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,还包括:茉莉酸母液配制:用2%(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/L的母液,并用0.22μm的微孔滤膜灭菌,得到灭菌后的茉莉酸甲酯母液;

将该茉莉酸甲酯母液添加到罗汉果组培过程中的固体培养基中,至茉莉酸甲酯的终浓度为50-400μmol/L;

用乙醇助溶,将茉莉酸甲酯母液配成50-400μmol/L的溶液,施加于所述罗汉果栽培过程中。

7.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,还包括如下步骤:qRT-PCR检测UGT72B21基因的表达:

1)采集罗汉果果实,切成2-4mm小块并分别用锡箔纸包好,立即置于液氮中速冻,保存于-80℃备用;

2)采用Trizol法提取罗汉果果实总RNA;

3)将RNA反转录为cDNA;

4)采用ABI7500实时荧光定量PCR仪检测UGT72B21基因的表达量,其中,扩增UGT72B21的引物序列为:上游引物CGCCATATGCACCACCACCACCACCACATGGAAGCTACGCAGAGAGACG,下游引物CCCTCGAGTTAAGACTCAAGAAATGCAAACTTA,内参基因用UBQ5基因,扩增引物序列为:上游引物ATAAAAGACCCAGCACCACATTC,下游引物CCCTTGCCGACTACAACATCC。

8.如权利要求3所述的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法,其特征在于,所述罗汉果栽培过程中,向罗汉果表面喷洒的茉莉酸甲酯的温度为4~10℃,同时,还采用注射的方式将茉莉酸甲酯注射入罗汉果植株的主茎中,注射量为5~16ml,注射的速率为4~8ml/h。