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专利号: 2017100825864
申请人: 长江大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鉴别S组山羊草种属Psy1基因等位变异的方法,具体如下:(1)提取小麦S组山羊草种籽粒基因组DNA,作为PCR反应以模板;

(2)PCR反应体系(20μL)为:模板DNA 50ng,1×PCR buffer,MgCl2 1.5mM,dNTP 150μM,YP7B-5标记物0.4μM,Taq酶(或LA-Taq酶)1U;

PCR反应在MJ Research PTC-200PCR仪上进行;

PCR反应程序:首先95℃5min;然后95℃30s,再由60-63℃30s,72℃1min,共40个循环;

最后72℃5min,4℃保温;

(3)PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离,将目标条带连接至pMD18-T载体上进行克隆测序;

(4)将得到的扩增片段序列与来自普通小麦及其近缘种对应的5个Psy1-B1/Psy1-S1等位基因(包括来自普通小麦的Psy1-B1d,来自栽培二粒小麦的Psy1-B1k以及来自拟斯卑尔脱山羊草的Psy1-S1a、Psy1-S1b和Psy1-S1c)进行序列比对,在确定外显子和内含子位置的同时进一步检测可能存在的SNP和InDel。

2.根据权利要求1所述的鉴别S组山羊草属的方法,其特征在于,YP7B-5标记物为一对引物,所述引物序列信息如下:上游引物:5’-GGACCTTGCTGATGACGGAG-3’;

下游引物:5’-GGGGAACTTGGTGATGGTGTC-3’。

3.根据权利要求1所述的鉴别S组山羊草属的方法,其特征在于,所述S组山羊草种属是指拟斯卑尔脱山羊草、高大山羊草、双角山羊草和西尔斯山羊草。