1.一种麻疯树无菌苗各组织诱导愈伤的方法,其特征在于,包括如下具体步骤:
S1.选取麻疯树种子,去除种皮后对种仁进行消毒;
S2.配制MS培养基,并于121℃灭菌15~20min,取出放置于无菌操作室冷却,待培养基凝固后使用;
S3.在消毒后种仁的子叶顶端位置切口,露出子叶顶端,将处理后的种仁插入播种在步骤S2的MS培养基上培养,使切口端不接触培养基,培养20d后得到麻疯树无菌苗的子叶;培养30d后得到无菌苗的真叶、带真叶的叶柄、茎段、子叶、带子叶的叶柄、子叶叶柄、带叶柄下胚轴和下胚轴;
S4.切取步骤S3培养的麻疯树无菌苗的子叶,将子叶的叶片切为块状,将块状子叶混合后,接种于愈伤组织诱导培养基中,各处理10瓶重复,每瓶2~5片子叶,在温度22~28℃,光照12h/d,光照强度2000~2500lx条件下愈伤诱导5~20d,观察麻疯树子叶愈伤组织的诱导情况;
S5.切取步骤S3培养的麻疯树无菌苗的真叶、带真叶的叶柄、茎段、子叶、带子叶的叶柄、子叶叶柄、带叶柄下胚轴和下胚轴,分别接种于愈伤组织诱导培养基中培养;各处理10瓶重复,每瓶3~7片组织,在温度22~28℃,光照12h/d,光照强度2000~2500lx条件下愈伤诱导15d后,观察上述8种麻疯树组织的愈伤诱导情况。
2.根据权利要求1所述麻疯树无菌苗各组织的诱导愈伤的方法,其特征在于,步骤S1中所述消毒的方法为:用75%的乙醇消毒40~50s后,用无菌水冲洗50~70s,再用消毒试剂消毒8~15min,无菌水冲洗5次,每次50~70s;所述消毒试剂为1~2%的辛吉尔灭或2~5%的NaClO。
3.根据权利要求1所述麻疯树无菌苗各组织的诱导愈伤的方法,其特征在于,步骤S2中所述MS培养基的成分为MS营养物,蔗糖和琼脂粉。
4.根据权利要求3所述麻疯树无菌苗各组织的诱导愈伤的方法,其特征在于,所述MS营养物:蔗糖:琼脂粉的质量比为(4.4~4.5):(25~30):(6~8)。
5.根据权利要求1所述麻疯树无菌苗各组织诱导愈伤的方法,其特征在于,步骤S3中所述切口的长度为2~3mm;所述的插入播种的方式为水平横放或垂直插入。
6.根据权利要求1所述麻疯树无菌苗各组织的诱导愈伤的方法,其特征在于,步骤S4中所述块状的尺寸为宽3~5mm,长0.5~1.5cm。
7.根据权利要求1所述麻疯树无菌苗组织的诱导愈伤的方法,其特征在于,步骤S4中所述的愈伤组织诱导培养基的成分为步骤S2所述MS培养基、2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、1-萘乙酸和水解酪蛋白。
8.根据权利要求7所述麻疯树无菌苗各组织诱导愈伤的方法,其特征在于,所述2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、1-萘乙酸和水解酪蛋白的质量比为(0.25~1.5):(0.1~
0.75):(0.5~1.25):(50~400),所述2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、1-萘乙酸和水解酪蛋白的总质量与MS培养基的质量体积比为(50.85~403.5):1mg/L。
9.根据权利要求8所述麻疯树无菌苗各组织诱导愈伤的方法,其特征在于,所述2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、1-萘乙酸和水解酪蛋白的质量比为0.3:0.1:0.15:80,所述
2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、1-萘乙酸和水解酪蛋白的总质量与MS培养基的质量体积比为402.75:1mg/L。
10.根据权利要求1所述麻疯树无菌苗组织的诱导愈伤的方法,其特征在于,步骤S5中所述麻疯树无菌苗的真叶、茎段、子叶、子叶叶柄和下胚轴均水平横放于愈伤组织诱导培养基上,所述带真叶的叶柄、带子叶的叶柄和带叶柄下胚轴均垂直插入愈伤组织诱导培养基中。