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专利号: 2016109355709
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-12-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,包括富集、分离纯化及筛选,其特征在于:所述富集过程中使用的水酪素培养基由以下成分及含量组成:KH2P04 0.001~0.01%、MgSO4 0.001 0.01%、ZnCl2 0.0001 0.01%、Na2HPO4·7H2O 0.01 0.1%、NaCl 0.001 0.01%、~ ~ ~ ~CaCl2 0.0001~0.01%、FeSO4 0.001~0.01%、聚乙烯吡咯烷酮0.001~0.01%、干酪素0.01~

0.1%、Tryptilase 0.0001 0.01%、琼脂0.1 1%和余量的水。

~ ~

2.根据权利要求1所述的金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,其特征在于以下步骤:

1)富集:将经处理的土样加入种子培养基中,封口,置于70 90℃水浴锅中加热5~ ~

15min,然后于27 38℃、100 200r/min的条件下振荡培养18 30h,然后梯度稀释,将菌液涂~ ~ ~布与于无菌的酪素培养基平板上,倒置于25 35℃培养箱中培养24 48h;

~ ~

2)分离纯化:挑去较大的菌株接入试管斜面培养基,25 35℃培养18 30h;

~ ~

3)筛选:选取形态特征一致的单菌落,在脱脂奶粉培养基上2 5次划线分离,得到纯化~的单菌落,接种于斜面保存培养基,置于冰箱中保存;

所述酪素培养基由以下成分及含量组成:KH2P04 0.001~0.01%、MgSO4 0.001~0.01%、ZnCl2 0.0001~0.01%、Na2HPO4·7H2O 0.01~0.1%、NaCl 0.001~0.01%、CaCl2 0.0001~0.01%、FeSO4 0.001 0.01%、聚乙烯吡咯烷酮0.001 0.01%、干酪素0.01 0.1%、Tryptilase 0.0001~ ~ ~

0.01%、琼脂0.1 1%和余量的水。所述脱脂牛奶固体培养基由以下成分及含量组成:脱脂奶~ ~粉0.1 2%、聚乙烯吡咯烷酮0.001 0.01%、琼脂0.1 1%和余量的水。

~ ~ ~

3. 根据权利要求2所述的金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,其特征在于:所述种子培养基由以下成分及含量组成:蛋白胨0.01 0. 1%,牛肉膏0.01 0. 1%,氯化钠~ ~

0.01 0.1%和余量的水。

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4. 根据权利要求2所述的金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,其特征在于:所述试管斜面培养基由以下成分及含量组成:蛋白胨0.01 0.1%,牛肉膏0.01 0.1%,氯化钠~ ~

0.03 0.1%,醇胺 0.001 0.1%、琼脂0.1 1%和余量的水。

~ ~ ~

5.根据权利要求2所述的金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,其特征在于:所述脱脂牛奶固体培养基由以下成分及含量组成:脱脂奶粉0.1 2%、己二酸0.001 0.01%、琼~ ~脂0.1 1%和余量的水。

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6.根据权利要求2、3和4所述的金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,其特征在于:所述种子培养基和试管斜面培养基pH值均为8.0。

7. 根据权利要求2和5所述的金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选方法,其特征在于:所述脱脂牛奶固体培养基 pH值为7.2 7.4。

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