1.一种高产磷酸酶的重组菌,其特征在于,以大肠杆菌为宿主,以pET28a为载体,表达SEQ ID NO.1所示基因。
2.一种高产磷酸酶的重组菌的构建方法,所述方法是以pET28a为载体,将来源于荧光假单胞菌的编码酸性磷酸酶的基因与所述载体连接,在大肠杆菌中重组表达。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述编码酸性磷酸酶的基因如SEQ ID NO.1所示,所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
4.应用权利要求1所述重组菌生产磷酸酶的方法,其特征在于,将所述重组菌培养至OD600为0.4-0.6,加入IPTG诱导磷酸酶的表达。
5.一种生产维生素C-2-磷酸酯的方法,其特征在于,所述方法是以维生素C为底物,应用权利要求1所述重组菌转化底物生产维生素C-2-磷酸酯。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述转化条件是:pH 3~7,转化温度为30~50℃,转化时间2~8h。
7.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,用所述重组菌的湿细胞进行转化;湿细胞添加量为60-100mg/mmol维生素C。
8.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,用所述重组菌生产的磷酸酶进行转化;
所述转化体系是以维生素C浓度与焦磷酸钠为底物,其摩尔比为(2.5~6):6,所述磷酸酶添加量为0.5-1U/mmol维生素C。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述磷酸酶经过纯化,所述纯化是将所述重组菌破壁,采用葡聚糖镍进行亲和层析纯化酸性磷酸酶蛋白,分别用0、10、20、30、40、
50mM的咪唑洗脱杂质,再以500mM的咪唑缓冲液特异性洗脱目标蛋白,再进行梯度透析获得纯磷酸酶蛋白。
10.权利要求1所述重组菌在食品、医药、化工领域的应用。