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专利号: 2016104539585
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高产过氧化氢酶的基因工程菌,其特征在于:将来源于短小芽孢杆菌过氧化氢酶基因KatX2分别与表达载体pET-28a和pMA5-HpaII连接,构建重组表达载体pET-28a-KatX2及pMA5-KatX2,并将重组表达载体分别转化至枯草芽胞杆菌WB600中,构建枯草芽胞杆菌基因工程菌,并将其用于生产过氧化氢酶,所述的过氧化氢酶基因序列如SEQ No.1所示;

将所述的枯草芽胞杆菌基因工程菌发酵生产过氧化氢酶,其步骤为:

将枯草芽胞杆菌基因工程菌利用LB培养基活化,37℃、160r/min培养过夜后转接于2L发酵培养基中,接种量8%,培养温度37℃,转速300r/min,通气量1.0vvm,培养48h后,4℃,

8000r/min离心10min收集发酵液及菌体,其中菌体用pH 7.0的50mM PB缓冲液洗涤二次,然后重悬于培养时同等体积的pH 7.0的50mM PB缓冲液中,利用60MPa弗氏细胞压碎器对细胞悬浮液进行细胞破碎;

所述的培养基包括(g/L):蔗糖25,胰蛋白胨5,玉米浆15,K2HPO4 8,KH2PO4 2,MgSO4 1,pH 7.2。