1.一种里氏木霉重组t-PA的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：将里氏木霉发酵制得的含有t-PA的粗酶液预处理后得到澄清液；

所述澄清液采用D296强阴离子交换树脂柱进行脱色，脱色后用磷酸缓冲液洗脱，得到洗脱液；

所述洗脱液采用硫酸铵进行盐析，得到沉淀；

将所述沉淀用磷酸缓冲液溶解，然后进行透析脱盐；

脱盐后的酶液采用Q-Sepharose High Performance强离子交换色谱进行分离纯化，用磷酸缓冲液配置成的0-1mol/L的氯化钠进行梯度洗脱收集得到活性组分液；

所述活性组分液经冷冻抽干即得t-PA成品。

2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述D296强阴离子交换树脂柱的直径为1.5±0.2cm，长度为30±1cm。

3.根据权利要求2所述的分离纯化方法，其特征在于，脱色时，所述澄清液在D296强阴离子交换树脂柱中的线速度小于0.5cm/min。

4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，盐析时，硫酸铵的添加量为：用硫酸铵调节所述洗脱液至饱和度为40％-50％，优选为45％。

5.根据权利要求4所述的分离纯化方法，其特征在于，所述盐析的温度为2-6℃，时间为

7-9h；

盐析后，在2-6℃，以7000-8000r/min离心20-30min，得到所述沉淀。

6.根据权利要求5所述的分离纯化方法，其特征在于，在将所述沉淀用磷酸缓冲液溶解步骤中，所述沉淀与所述磷酸缓冲液的质量比为1:4-6。

7.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述透析脱盐采用透析袋进行，所述透析袋截留分子量为10000Da。

8.根据权利要求7所述的分离纯化方法，其特征在于，所述透析袋在使用前，先在0.9-

1.1mol/L EDTA溶液中煮沸8-15min，再在质量浓度为1.9％-2.1％的NaHCO3溶液中煮沸8-

12min，最后在蒸馏水中煮沸8-15min。

9.根据权利要求8所述的分离纯化方法，其特征在于，所述Q-Sepharose High Performance强离子交换色谱中的柱子的直径为2.6±0.2cm，长度为7±1cm；流速为1.8-

2.2mL/min。

10.根据权利要求1-9任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤中使用的磷酸盐缓冲液的浓度均为0.018-0.022mol/L，pH均为7.3-7.5。