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专利号: 2015101089036
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于所述方法为:以含卤醇脱卤酶编码基因的重组基因工程菌经诱导培养获得的湿菌体超声破碎后的上清液为催化剂,以环氧化物为助剂,以待测水样作为原料,在40~45℃、500rpm条件下反应30~60min,取反应液用乙酸乙酯萃取,取上层有机相经无水硫酸钠干燥后采用气相色谱检测4-叠氮-3-羟基丁醇或4-氰基-3-羟基丁醇峰面积,根据以4-叠氮-3-羟基丁醇或4-氰基-3-羟基丁醇峰面积为纵坐标、以叠氮化钠或氰化钠浓度为横坐标制作的叠氮化钠标准曲线或氰化钠标准曲线,确定待测水样中叠氮根离子或者氰离子的浓度;所述催化剂的用量以含卤醇脱卤酶编码基因的重组基因工程菌经超声破碎前湿菌体重量计为5~20mg/mL待测水样,环氧化物的用量为0.05~0.2mol/L待测水样。

2.如权利要求1所述检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于所述卤醇脱卤酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于气相色谱检TM

测条件为:采用日本岛津气相GC-14,色谱柱Astec CHIRALDEX G-TA,载气为氦气,分流比为20:1,进样口和检测器的温度均为220℃,GC程序为120℃保留5min,5℃/min升温至

140℃,保留2min。

4.如权利要求1所述检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于标准曲线按如下方法制备:用蒸馏水配制0.2~2.0mM的叠氮化钠水溶液,分别向2ml EP管中加入

500μl不同浓度的叠氮化钠水溶液,450μl环氧丁烷溶液和50μl卤醇脱卤酶粗酶液,在40℃,500rpm,反应30min,分别向EP管中加入1ml乙酸乙酯进行萃取,取上层有机相

800μl,经无水硫酸钠干燥后采用气相检测4-叠氮-3-羟基丁醇的峰面积,以叠氮化钠浓度为横坐标,以4-叠氮-3-羟基丁醇的峰面积为纵坐标,获得叠氮化钠标准曲线;所述卤醇脱卤酶粗酶液为卤醇脱卤酶经发酵培养获得的湿菌体超声破碎后的上清液,所述粗酶液的浓度以超声破碎前湿菌体重量计为0.1g/ml;所述环氧丁烷溶液是用200mM、pH 7.5的PBS缓冲液配制的200mM环氧丁烷溶液,氰化钠标准曲线的制作同叠氮化钠标准曲线。

5.如权利要求1所述检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于环氧化物为环氧丁烷或环氧辛烷。

6.如权利要求1所述检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于环氧化物的用量为0.1mol/L水样。

7.如权利要求1所述检测水中叠氮根离子或氰离子的方法,其特征在于催化剂的制备方法为:将含卤醇脱卤醇编码基因的重组基因工程菌接种在含终浓度50μg/ml的氨苄青霉素的LB培养基中,置于37℃摇床中培养至OD600达到0.6~0.8时,加入终浓度0.2mM异丙基硫代半乳糖苷,在28℃摇床诱导12-14小时,9000rpm离心10分钟,弃上清,离心获得的湿菌体按照0.1g/L的比例混悬于100mM的磷酸缓冲液中,50%功率超声破碎30min,破碎混合液在12000rpm离心20分钟,收集上清,获得含有卤醇脱卤酶的粗酶液,即为催化剂。