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专利号: 2015100352857
申请人: 江苏发士达生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-06-25
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的引物对和探针,其特征在于:包括检测HIV-1病毒RNA的pol基因的第184位、151位和65位突变位点M184V、M184I、Q151M和K65R的ARMS引物对和Taqman探针;

M184V的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列,Taqman探针为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记

5’端和3’端;

M184I的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.2和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列,Taqman探针为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记

5’端和3’端;

Q151M的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.5和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列,Taqman探针为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记

5’端和3’端;

K65R的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示的核苷酸序列,Taqman探针为SEQ ID No.9所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记5’端和3’端。

2. 用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的引物对和探针,其特征在于:包括检测HIV-1病毒RNA的pol基因的第184位突变位点M184V、M184I的ARMS引物对和Taqman探针;

M184V的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列;

M184I的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.2和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列;

ARMS引物对的Taqman探针为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记5’端和3’端。

3.用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的引物对和探针,其特征在于:包括检测HIV-1病毒RNA的pol基因的第151位突变位点Q151M的ARMS引物和Taqman探针;

Q151M的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.5和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列,ARMS引物对的Taqman探针为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记5’端和3’端。

4.用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的引物对和探针,其特征在于:包括检测HIV-1病毒RNA的pol基因的第65位突变位点K65R 的ARMS引物和Taqman探针;

K65R的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示的核苷酸序列,ARMS引物对的Taqman探针为SEQ ID No.9所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记5’端和3’端。

5.用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的试剂盒,其特征在于:包括权利要求1至4任一项所述的ARMS引物对和探针。

6.根据权利要求5所述的用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的试剂盒,其特征在于:还包括RT-PCR 缓冲液、dNTPs、MgCl2、M-MLV逆转录酶、Taq DNA聚合酶。

7.根据权利要求6所述的用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的试剂盒,其特征在于:还包括模板RNA、试剂盒质控品引物对和试剂盒质控品的Taqman探针,试剂盒质控品引物对的上游序列和下游序列分别为SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示的核苷酸序列;试剂盒质控品的Taqman探针为SEQ ID No.13所示的核苷酸序列,分别用FAM和BHQ1标记5’端和3’端。

8.根据权利要求7所述的用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的试剂盒,其特征在于:各组分含量分别为:RT-PCR 缓冲液终浓度0.5×~2×;

dNTPs终浓度 0. 6~1.2mM;

ARMS引物对的上、下游引物以及试剂盒质控品引物对的上、下游引物的终浓度均为

100~600nM;

M-MLV逆转录酶终浓度0.4~2.4U/μL;

TaqDNA聚合酶终浓度 0.01~0.06U/μL;

MgCl2 终浓度为1.5~3.5mM;

ARMS引物对的Taqman探针以及试剂盒质控品引物对的Taqman探针终浓度均为100~

600nM;

模板RNA终浓度 0.01~100ng/μL。

9.根据权利要求6所述的用于检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点的试剂盒,其特征在于:RT-PCR 缓冲液终浓度1×;

dNTPs终浓度 0.8mM;

ARMS引物对的上、下游引物以及试剂盒质控品引物对的上、下游引物的终浓度均为

200nM;

M-MLV逆转录酶终浓度1.6U/μL;

TaqDNA聚合酶终浓度0.04U/μL;

MgCl2 终浓度为2mM;

ARMS引物对的Taqman以及试剂盒质控品引物对的Taqman探针终浓度均为100nM;

模板RNA终浓度 0.1~10ng/μL。

10.权利要求1至4任一项所述的ARMS引物对和探针在检测艾滋病治疗药物3TC和FTC耐药突变位点中的应用。