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专利号: 2015100198750
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于以具有多级次孔隙的阳离子交换嵌合型晶胶为分离介质,通过晶胶层析实现分离从牛乳清中分离乳过氧化物酶。

2.如权利要求1所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于所述分离方法包括以下步骤:

1)以缓冲溶液对阳离子交换嵌合型晶胶床柱进行平衡;

2)以用缓冲溶液稀释后的乳清作为上样液,通过阳离子交换嵌合型晶胶床柱进行层析,使乳过氧化物酶吸附于晶胶骨架,而其它杂质和未吸附的杂蛋白顺利穿过晶胶床层;

3)用缓冲溶液进行冲洗,除去晶胶孔隙内未被吸附的杂质;

4)用含盐洗脱液进行分步洗脱,收集含乳过氧化物酶的洗脱峰,经脱盐和冷冻干燥处理后得到乳过氧化物酶。

3.如权利要求1或2所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于所用阳离子交换嵌合型晶胶为内嵌纤维素微球的聚甲基丙烯酸羟乙酯嵌合型晶胶分离介质,带有磺酸基阳离子交换功能基团。

4.如权利要求3所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于内嵌纤维素微球的聚甲基丙烯酸羟乙酯嵌合型晶胶分离介质具有适于乳清料液在较高流速下穿过床层及乳过氧化物酶迅速吸附层析的多级次孔隙,孔隙孔径为0.1~300μm。

5.如权利要求2所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液,其pH为5.8~9,浓度为10~50mM。

6.如权利要求2所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于乳清上样液的稀释倍数2~5倍,优选为3倍。

7.如权利要求4所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于吸附层析的较高流速为0.5~10 cm/min,优选为1 cm/min。

8.如权利要求2所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于步骤4)中所述含盐洗脱液为含0.05~2M NaCl的缓冲溶液。

9.如权利要求2所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于所述缓冲溶液为10mM的磷酸盐缓冲溶液,其pH为 5.8。

10.如权利要求8所述的从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法,其特征在于步骤4)中所述分步洗脱分为四步洗脱,四步洗脱所用含盐洗脱液依次为含0.075 M、0.15 M、1 M和2M NaCl的磷酸盐缓冲溶液,NaCl的磷酸盐缓冲溶液的pH为5.8。