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专利号: 2014107752339
申请人: 郑州大学第一附属医院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种和丙型肝炎病毒NS5B RNA聚合酶活性位点特异结合的多肽,其特征是,该序列核心为Ile-Asn-Gln-Arg-Lys-Val-Trp。

2.根据权利要求1所述的多肽在抗丙型肝炎的药物或制剂的应用。

3.根据权利要求1所述的多肽在制备检测HCV及其NS5B蛋白中的应用。

4.根据权利要求1所述的多肽在建立HCV NS5B的定性或定量检测试剂盒的应用。

5.利用HCV NS5B RNA聚合酶活性评价体系进行多肽筛选的方法,其特征是,该方法包括以下步骤:(1)取100ug/ml的 Poly(A)磁珠5μl,加入RNasin 0.5uL,同时加入5μl的10×RNA

2+

Buffer、25mM 的Mg 离子4ul,加水补充至50μl,于37℃条件下水浴30min;

(2)将所有合成备筛选的多肽均溶解于0.5%的DMSO中;取10mM 的合成多肽15μl与

15μl NS5B相应表达蛋白于37℃反应30min,然后取10μl用于下一步反应;

(3)加入1mM的Bio-11-UTP 0.5μl、10mM 的rUTP 5μl,于37℃条件下水浴30min;

阴性对照组仅加入10mM 的rUTP 5μl,同时加入10μl NS5B相应的表达蛋白作为阳性对照;

(4)将反应后的溶液置于磁力架上,吸附5min,然后加入 2×SSC 溶液200μl,清洗三次;

(5)加入FAM标记的1000倍稀释的链霉亲和素100μl,于37℃条件下水浴30min;

(6)将反应后的溶液置于磁力架上吸附5min,然后加入2×SSC 的溶液200μl清洗三次,加入50μl灭菌水,于Abs/Em=492/518nm条件下读值,以三次测定的平均值为最终结果;

(7)以(多肽反应组的荧光计数值-阴性荧光值)/(阳性荧光值-阴性荧光计数值)的比值高低,判定多肽对NS5B表达蛋白的酶活抑制性。