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专利号: 2014107444107
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种柑桔黄龙病防控药剂的快速筛选方法,其特征在于,所述柑桔黄龙病防控药剂快速筛选方法的初步评价材料为带菌柑桔木虱,并采用RT-qPCR实时动态监测所述黄龙病病菌在带菌柑桔木虱体内的消长程度来评价药效。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1. 饲喂处理:带菌柑桔木虱成虫取食适量化学药剂溶液后,再用健康的柑桔叶片饲养;

S2. 药效评价:提取饲喂处理后的带菌柑桔木虱总DNA,再通过RT-qPCR技术实时动态监测黄龙病病菌在木虱体内的消长程度来初步评价药效。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述化学药剂溶液的浓度为1000 mg/L。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述化学药剂的处理时间为24h。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述木虱成虫经过饥饿处理12h后再用于S1步骤。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述S2步骤中RT-qPCR实时动态监测的检测引物为HLBasf/HLBasr,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1~2所示;探针为HLBp,其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;

所述检测反应体系为2×TaqMan PCR Master Mix 10 μL,10 μmol/L的上下游引物和探针各0.4 μL,DNA模板1 μL,再加灭菌ddH2O至总体积20 μL,反应条件为95℃预变性30 s后;95℃退火5 s,60℃延伸30 s,共40个循环;在每个循环的退火和延伸阶段同步实时采集荧光,根据标准曲线,换算出待测样品中黄龙病病原的含量。