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专利号: 2014105683230
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酶活力提高的天冬酰胺酶突变体,是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的天冬酰胺酶第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸或色氨酸;或将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸;或在将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸的同时,将第133位的天冬酰胺分别突变为色氨酸或酪氨酸。

2.根据权利要求1所述的天冬酰胺酶突变体,其特征在于,天冬酰胺酶突变体的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2-6所示。

3.一种获得权利要求1所述突变体的方法,是通过定点突变技术将天冬酰胺酶蛋白质分子内部第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸、色氨酸;或将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸;或在将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸的同时,将第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸或色氨酸。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,将含有编码天冬酰胺酶的基因与载体pET22b(+)连接,转化大肠杆菌E.coli rosetta;挑选转化子接种到LB液体培养基中,37℃培养12h,转接到TB培养基中,接种量为3%;菌体长到OD600为1.5时,加入IPTG诱导,并将培养温度降到30℃,培养24h,收集发酵上清,纯化获得天冬酰胺酶突变体。

5.一种表达权利要求1所述天冬酰胺酶突变体的大肠杆菌,是将含有编码天冬酰胺酶的基因与表达载体连接后转化大肠杆菌。

6.根据权利要求5所述的大肠杆菌,其特征在于,将含有编码天冬酰胺酶的基因与载体pET22b(+)连接,转化大肠杆菌E.coli rosetta。

7.权利要求1所述天冬酰胺酶突变体的应用。

8.权利要求5所述大肠杆菌的应用。

9.一种提高天冬酰胺酶活力的方法,其特征在于,是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的天冬酰胺酶蛋白质分子内部第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸、色氨酸;或将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸;或在将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸的同时,将第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸或色氨酸。