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专利号: 2014103591499
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)ZJB-11071,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国·武汉·武汉大学,430072,保藏编号CCTCC No:M 2013314,保藏日期2013年7月5日。

2.如权利要求1所述的蜡状芽孢杆菌ZJB-11071在生物催化卤代醇生成环氧化物中的应用,其特征在于所述的应用为:以蜡状芽孢杆菌ZJB-11071经发酵培养后的湿菌体为催化剂,以卤代醇为底物,于pH值为7.0~7.5的缓冲液中,在35℃下进行转化反应,转化反应结束后,将转化反应液用乙酸乙酯萃取,离心,取上层有机相即为含有环氧化物的混合液,将混合液分离纯化,获得所述环氧化物;所述卤代醇为1,3-二氯-2-丙醇、2,3-二氯-2-丙醇或

1,3-二溴-2-丙醇。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述催化剂的用量以湿菌体质量计,终浓度为

30~80g/L,所述底物的初始浓度为20~50mmol/L。

4.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:(1)斜面培养

将蜡状芽孢杆菌ZJB-11071接种至斜面培养基,在30℃培养12h,获得斜面菌体;

所述斜面培养基终浓度组成为:NaCl 10.0g/L,酵母粉5.0g/L,蛋白胨10.0g/L,琼脂

20.0g/L,溶剂为水,pH值为7.0;

(2)种子培养

从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基,在30℃培养24h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:NaCl 10.0g/L,酵母粉5.0g/L,蛋白胨10.0g/L,溶剂为水,pH值为7.0;

(3)发酵培养

将种子液以体积浓度1%的接种量接种至发酵培养基中,30℃,150rpm振荡培养60h后,在12000g下离心5min,收集湿菌体;

所述发酵培养基终浓度组成为:乳糖8g/L,蛋白胨6g/L,Na2HPO4 3.2g/L,K2HPO4 1.5g/L,Na2EDTA 0.06g/L,MnSO4 0.002g/L,MgSO4 0.001g/L,ZnSO4 0.002g/L,FeSO40.01g/L,溶剂为水,pH值为6.8。

5.如权利要求1所述的蜡状芽孢杆菌ZJB-11071在生物催化合成手性药物中间体中的应用,其特征在于所述的应用为:以蜡状芽孢杆菌ZJB-11071经发酵培养后的湿菌体为催化剂,以S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物,于pH值为7.0~7.5的缓冲液中,在35℃下进行转化反应,转化反应结束后,将转化反应液用乙酸乙酯萃取,离心,取上层有机相,将混合液分离纯化,获得R(-)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述催化剂的用量以湿菌体质量计,终浓度为

30~80g/L,所述底物的初始浓度为20~50mmol/L。

7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:(1)斜面培养

将蜡状芽孢杆菌ZJB-11071接种至斜面培养基,在30℃培养12h,获得斜面菌体;

所述斜面培养基终浓度组成为:NaCl 10.0g/L,酵母粉5.0g/L,蛋白胨10.0g/L,琼脂

20.0g/L,溶剂为水,pH值为7.0;

(2)种子培养

从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基,在30℃培养24h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:NaCl 10.0g/L,酵母粉5.0g/L,蛋白胨10.0g/L,溶剂为水,pH值为7.0;

(3)发酵培养

将种子液以体积浓度1%的接种量接种至发酵培养基中,30℃,150rpm振荡培养60h后,在12000g下离心5min,收集湿菌体;

所述发酵培养基终浓度组成为:乳糖8g/L,蛋白胨6g/L,Na2HPO4 3.2g/L,K2HPO41.5g/L,Na2EDTA 0.06g/L,MnSO4 0.002g/L,MgSO4 0.001g/L,ZnSO4 0.002g/L,FeSO40.01g/L,溶剂为水,pH值为6.8。