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专利号: 2014102258003
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法,包括如下步骤:1)内生真菌的活化及种子液的制备,所述的内生真菌命名为DX-SES3,分类为小球壳孢属菌Microsphaeropsi sarundinis,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏时间为2014年5月3日,保藏号为CCTCCM2014177;2)GAMG生物转化:将步骤1)的种子液按质量分数20-40%的接种量加入到转化培养基中,进行GAMG的生物转化;3)GAMG的分离制备:生物转化后的GAMG富聚于内生真菌菌球的表面,布氏漏斗抽滤或六层纱布过滤,收集菌体,用体积比为20%~100%的乙醇溶液冲洗菌体3-5次,收集乙醇溶液,后减压浓缩,再喷雾干燥,获得纯度较大的GAMG成品,并用HPLC、LC-MS进行检测。2.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法,其特征在于所述的种子液培养制备为:将内生真菌DX-SES3(Microsphaeropsis arundinis)接种到PDA斜面培养基中20~30℃培养活化72~108小时,并制作孢子悬浮液,将孢子悬浮液加入到种子培养基中,20~30℃,150~300 r/min,摇床培养至对数生长期。3.如权利要求1 所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法,其特征在于所述的种子培养基的组成为:每升培养基中含葡萄糖10~40g,甘草酸或甘草酸铵盐0 .1~1 g,KH2PO41.0~3.0 g,NH4NO3 2.0~5.0 g,NaCl 0.3~0.8 g,酵母粉0.05~0.3 g,MgSO40.1~0.5 g, CaCl20.01~0.5 g, FeSO4 0.014 g ,ZnSO4·7H2O 2.9 mg,MnCl2·4H2O 2.0 mg, CuSO4·5H2O 0.25 mg,CoCl2·6H2O 0.24 mg,Na2MoO4·2H2O 0.24 mg, H3BO3 0.03 mg, 其余为纯水,调pH为5.0~7.0。4.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法,其特征在于所述的转化培养条件为:28℃~40℃,转速150~280 r/min。5.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法,其特征在于所述的转化培养基组成为:每升培养基中含甘草酸或甘草酸铵盐 2~30 g, KH2PO4 1 .0~3 .0 g, NH4NO3 2.0~4.0 g, NaCl 0.3~0.8 g,酵母粉0.05~0.1 g, MgSO4  0.1~0.5 g, CaCl2  0 .01~0 .5 g, FeSO4 0 .014 g , ZnSO4·7H2O2.9 mg,MnCl2·4H2O 2.0 mgCuSO4·5H2O 0.25 mg, CoCl2·6H2O 0.24 mg, Na2Mo4·2H2O 0.24 mg, H3BO3 0.03 mg,其余为纯水,调pH为3.5~9.0,其中甘草酸或甘草酸铵盐是菌体产β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导剂。