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专利号: 2014100580647
申请人: 河南科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种山羊速激肽TAC1基因多态性检测试剂盒,其特征在于:主要包括酶切引物P:上游引物PS:5’-GCTCTATGAGCAGAGATTTC-3’,下游引物PAS:5’-GATTCCTGTTCTTGGTGG-3’;

还包括Hae Ⅲ。

2.根据权利要求1所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测试剂盒,其特征在于:还包括Taq聚合酶、dNTP、Hae Ⅲ及缓冲液。

3.一种山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)以包含速激肽TAC1基因的山羊基因组DNA为模板,用酶切引物P PCR扩增,得到扩增片段;

(2)取扩增片段进行Hae Ⅲ酶切,酶切产物电泳后根据电泳结果判断TAC1基因突变位点的基因型;

所述步骤(1)中酶切引物P为:

上游引物PS:5’-GCTCTATGAGCAGAGATTTC-3’,下游引物PAS:5’-GATTCCTGTTCTTGGTGG-3’;

所述步骤(2)中判断TAC1基因突变位点的基因型为:AA基因型表现为1条条带,AB基因型表现为3条条带,BB基因型表现为2条条带。

4.根据权利要求3所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:所述步骤(1)中PCR扩增反应体系为:10×PCR Buffer 2μL、2.5mol/L dNTP 0.8μL、5U/μL Taq聚合酶

0.3μL、上游引物PS 0.7μL、下游引物PAS 0.7μL、基因组DNA 1.25μL、ddH2O 14.25μL,总计

20μL。

5.根据权利要求4所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:所述步骤(1)中PCR扩增反应程序为:94℃预变性4min;94℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸30s,36个循环;最后72℃延伸10min,反应结束。

6.根据权利要求3所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:所述步骤(2)中Hae Ⅲ酶切体系为:Hae Ⅲ 200U、ddH2O 5μL、扩增片段4μL、10×M Buffer 1μL。

7.根据权利要求3所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:所述TAC1基因突变位点的检测方法包括以下步骤:以包含速激肽TAC1基因的山羊基因组DNA为模板,用引物对TAC PCR扩增得扩增产物;取扩增产物电泳得预期目标片段,测序判断TAC1基因突变位点;

所述的引物对TAC为:

上游引物TACS:5’-AATCGCTCGGAGACCCAAG-3’,下游引物TACAS:5’-TTGTGAGAAAGCTGGCCATG-3’。

8.根据权利要求7所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:所述的用引物对TAC PCR扩增的反应体系为:10×PCR Buffer 2μL、2.5mol/L dNTP 0.8μL、5U/μL Taq聚合酶0.3μL、上游引物TACS 0.7μL、下游引物TACAS 0.7μL、基因组DNA 1.25μL、ddH2O 

14.25μL,总计20μL。

9.根据权利要求7所述的山羊速激肽TAC1基因多态性检测方法,其特征在于:所述的用引物对TAC PCR扩增的反应程序为:94℃预变性4min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸

1min,36个循环;最后72℃延伸10min,反应结束。