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专利号: 2014100517041
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条,其特征在于:包括PVC底板(1),在PVC底板(1)两端分别设有样品垫(3)和吸水垫(7);

PVC底板(1)中部设置有硝酸纤维素膜检测层(2),在硝酸纤维素膜检测层(2)与样品垫(3)之间设置有金标垫(4);所述金标垫(4)一端与样品垫(3)相连接叠放,另一端叠放于硝酸纤维素膜检测层(2)上;

所述硝酸纤维素膜检测层(2)上依次设置有检测线(5)和质控线(6)。

2.根据权利要求1所述金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条,其特征在于:所述金标垫(4)包被有金标标记抗SEE抗体1E5。

3.根据权利要求1所述金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条,其特征在于:所述检测线(5)上包被有抗SEE抗体2E3。

4.根据权利要求1所述金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条,其特征在于:所述质控线(6)上包被有羊抗鼠IgG。

5.权利要求1所述金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条的制备方法,金黄色葡萄球菌肠毒素E缩写为SEE,其特征在于步骤为:(1)抗SEE特异性单克隆抗体的制备:

以北京军事医学科学院提供的重组表达的SEE为免疫原,免疫 8周龄的BALB/c小鼠,经免疫、细胞融合、筛选,共筛选到10个细胞株;

(2)特异性SEE双抗体检测抗体的筛选:

将步骤(1)纯化后的10株单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP,直接法鉴定标记成功后进行双抗体夹心法配对,确定特异性免疫胶体金快速检测试纸条所需要抗SEE抗体;其中1E5为金标抗体,2E3为包被抗体;

(3)金黄色葡萄球菌肠毒素E免疫胶体金快速检测试纸条的制备:a、空白胶体金的制备:

采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒,在锥形瓶中加入200mL去离子水和2mL质量浓度为1%的氯金酸,搅拌加热至沸腾,快速加入4mL质量浓度为1%的柠檬酸钠,继续加热

15~20分钟,至呈亮红色,然后室温中冷却,4℃冷藏保存;

b、胶体金标记抗体的制备:

空白胶体金溶液用0.1M K2CO3调节pH值至7.4,搅拌中滴加适量浓度抗体,每毫升空白胶体金溶液加入30μg抗体1E5,继续搅拌30分钟,离心,吸取上清,用金标抗体保存液重旋;

c、金标垫的制备:

调试三维平面点膜喷金仪仪器HM3055,将标记好胶体金的抗SEE抗体1E5均匀的喷在玻璃纤维膜上,喷液量0.6μL /cm,37℃ 烘干过夜,封袋备用;

d、包被膜的制备:

调试三维平面点膜喷金仪仪器HM3055,将稀释好的抗SEE抗体2E3均匀喷在硝酸纤维素膜上,得到检测线;将稀释好的羊抗鼠IgG均匀喷在硝酸纤维素膜上,得到质控线,喷液量为0.6μL /cm,37℃ 烘干过夜,封袋备用;

将PVC底板(1)、硝酸纤维素膜检测层(2)、样品垫(3)、金标垫(4)、检测线(5)、质控线(6)和吸水垫(7)组合,即得产品金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条。

6.权利要求1所述金黄色葡萄球菌肠毒素E的免疫胶体金快速检测试纸条的应用,其特征在于:适用于海关、企业、医院、检验检疫单位,可实现食品或临床样本中金黄色葡萄球菌肠毒素E的快速检测,最低检测限为0.25ng/mL。