1.一种葡萄糖氧化酶突变体,是以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为出发序列,将催化活性中心的甲硫氨酸突变为亮氨酸;所述突变体是将第524位的甲硫氨酸M突变为亮氨酸L,突变后的葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.编码权利要求1所述葡萄糖氧化酶突变体的核苷酸。
3.携带权利要求2所述核苷酸的载体、基因工程菌或转基因细胞系。
4.根据权利要求3所述的基因工程菌,其特征在于,是以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为宿主,以pPIC9K为载体,表达编码所述葡萄糖氧化酶突变体的基因。
5.构建权利要求4所述基因工程菌的方法,其特征在于,是通过PCR或化学合成得到编码突变体的核苷酸序列,连接表达载体pPIC9K获得重组质粒,将重组质粒转化P.pastoris GS115,获得基因工程菌。
6.应用权利要求4所述基因工程菌发酵生产葡萄糖氧化酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将携带突变基因的基因工程菌活化后,在30℃、200rpm下培养至OD600=
1.6-1.7,作为种子液;(2)将种子液以2%的接种量转入基本发酵培养基,于30℃、200rpm条件下发酵培养;(3)当在基本发酵培养基中培养至OD600=1.2-1.5时,收集菌体,将酵母细胞转入诱导培养基中诱导蛋白的产生;所述基本发酵培养基为:胰蛋白胨20g/L,酵母抽提物10g/L,甘油10mL/L,YNB 13.4g/L,100mM/L pH 6.0的磷酸缓冲液;所述诱导培养基为:胰蛋白胨20g/L,酵母抽提物10g/L,甲醇8mL/L,YNB 13.4g/L,100mM/L pH 6.0的磷酸缓冲液。
7.权利要求1所述葡萄糖氧化酶突变体的应用。