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专利号: 2013106583466
申请人: 中国科学院西北高原生物研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-06-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1. 一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法,包括以下步骤:

⑴原料预处理:将唐古特白刺的干燥果实挑选去杂,用水冲洗,洗去表面浮土,得到处理后的白刺果实;

⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液:将200 mL甲酸与9800 mL甲醇混合均匀即得;

⑶将所述步骤⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述白刺果实中,在室温避光状态下按1 g:1 ~5mL的比例进行常温浸提,提取次数为1~3次,每次12~24 h,合并得到提取液;

⑷所述提取液用滤纸除去不溶物、蛋白质、多糖后,得到滤液,该滤液于旋转蒸发仪上在40~50℃进行真空蒸发浓缩至膏状,得到白刺花色苷浸膏,并回收甲醇;

⑸大孔吸附树脂的处理:将D-101大孔吸附树脂用体积浓度为95% 的甲醇浸泡 24 小时,然后用体积浓度为95% 的甲醇进行洗涤,再用去离子水清洗;将该大孔吸附树脂缓慢装入树脂柱中,再用去离子水冲洗至柱中颗粒干净,不再沉降为止,即得处理后的大孔吸附树脂;

⑹将所述白刺花色苷浸膏用体积浓度为2 %的甲酸复溶后上所述处理后的大孔吸附树脂;上样后先以4~6倍柱体积的蒸馏水冲柱,然后再以3~6倍柱体积的甲醇冲柱,将花色苷类化合物解吸附,收集流出液;

⑺所述流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品,同时回收甲醇;

⑻将所述花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中,在柱温为25~40℃、流速为15~25 mL/min、进样量为200~600 mg、检测波长为525nm的条件下进行半制备色谱分离,根据出峰时间依次收集单体矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和芍药素-3-O-葡萄糖苷;然后采用高效液相色谱系统在柱温为25~40℃、流速为0.6~1.0 mL/min、进样量为10 ul、检测波长为525nm的条件下进行检测,当样品纯度低于90%时,再次采用高效半制备色谱柱进行二次分离,即得纯度≥90%的花色苷单体;最后,所述花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重,即得花色苷单体成品。

2.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法,其特征在于:

所述步骤⑺和步骤⑻中减压浓缩的条件均是指40~50℃水浴,转速45~55 r.p.m,真空泵压力为0.06~0.08MPa。

3.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法,其特征在于:

所述步骤⑻中真空冷冻干燥的条件是指冷肼温度为-45~-55 ℃,真空度为10~15 Pa。

4.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法,其特征在于:

所述步骤⑻中高效液相色谱分离的条件是指流动相分别为A相:A:体积浓度为10%的甲酸溶液中含有体积浓度为0.1%的三氟乙酸,B相:含有体积浓度为15%的甲醇的乙腈溶液;梯度洗脱程序为:0~20 min,3 % ~ 5 % B相,线性梯度;20~40 min,5 % B相,等度洗脱;40~55 min,5 % ~ 12 % B相,线性梯度;55~70 min,12 % ~ 22 % B相,线性梯度;70~100 min,22 % ~ 3 % B相,线性梯度。

5.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法,其特征在于:

所述步骤⑻中半制备色谱分离的条件是指流动相分别为A相:含有体积浓度为50 %的乙腈的甲醇,B相:体积浓度为5 %甲酸的水溶液;一次纯化程序为:0~30 min,25%~40%A相,线性梯度;30~35 min,40%A相,等度洗脱;35~50 min,40%~43%A相,线性洗脱;50~70 min,

43%~25%A相,线性洗脱;二次纯化程序为:流动相分别为A相:50 %甲醇水溶液,B相:5 %甲酸溶液,进行等度洗脱。