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专利号: 2013102159624
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种通过环介导等温扩增技术检测家蚕质型多角体病毒的引物组,其特征在于,所述引物组包括一对内侧引物CPVFI2/CPVBI2和一对外侧引物CPVF2/CPVB2,CPVF2、CPVB2、CPVFI2和CPVBI2引物的序列如SEQ ID NO:1~4所示。

2.一种家蚕质型多角体病毒RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于,包括一对内侧引物CPVFI2/CPVBI2和一对外侧引物CPVF2/CPVB2,CPVF2、CPVB2、CPVFI2和CPVBI2引物序列如SEQ ID NO:1~4所示。

3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含Bst DNA 聚合酶、反应液、稳定液、显色液和阳性对照液;所述反应液的配方为:每1L反应液中含有35~45 mM pH

8.8的 Tris-HCl、15~25 mM 氯化钾、15~20 mM硫酸镁、15~20 mM硫酸铵、0.15~0.25% Tween

20、2.5~3.0 mM dNTPs和1.5~1.8 M 甜菜碱。

4..根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,所述反应液的配方为:每1L反应液中含有40 mM pH 8.8 的Tris-HCl、20 mM氯化钾、16 mM硫酸镁、20 mM硫酸铵、0.2%Tween 20、

2.8 mM dNTPs和1.6 M 甜菜碱。

5.根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,所述稳定液为甘油;所述的显色液为SYBR Green I或EvaGreen;所述阳性对照液为含有家蚕质型多角体病毒基因组第5片段核苷酸部分序列的重组质粒。

6.根据权利要求2或3所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系为:

25 μL RT-LAMP反应体系为:

反应液 12.5μL;

5pmol/μL CPVF2/CPVB2 0.5μL ;

40pmol/μL CPVFI2/CPVBI2 1μL ;

8U Bst DNA polymerase 0.8 μL ;

10U逆转录酶 0.2μL;

RNA 2 μL;

DEPC水 补充至25μL;

所述反应条件为:60℃~65℃水浴40~60 min;最后80~95℃,灭活2~10 min。

7.根据权利要求6所述试剂盒,其特征在于,所述反应条件为:63℃水浴60 min;90℃,灭活2 min。

8.一种利用权利要求1至7任一项所述试剂盒检测家蚕质型多角体病毒的方法,其特征在于,包括如下步骤: S1.提取待测样品RNA;

S2.配置RT-LAMP反应体系;向反应体系中加入稳定液进行RT-LAMP反应;

S5.反应结束后,向反应产物中加入显色液进行染色检测,显色为绿色判断结果为阳性,显色为橙色判断结果为阴性。