1.一种通过环介导等温扩增技术检测家蚕质型多角体病毒的引物组,其特征在于,所述引物组包括一对内侧引物CPVFI2/CPVBI2和一对外侧引物CPVF2/CPVB2,CPVF2、CPVB2、CPVFI2和CPVBI2引物的序列如SEQ ID NO:1~4所示。
2.一种家蚕质型多角体病毒RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于,包括一对内侧引物CPVFI2/CPVBI2和一对外侧引物CPVF2/CPVB2,CPVF2、CPVB2、CPVFI2和CPVBI2引物序列如SEQ ID NO:1~4所示。
3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含Bst DNA 聚合酶、反应液、稳定液、显色液和阳性对照液;所述反应液的配方为:每1L反应液中含有35~45 mM pH
8.8的 Tris-HCl、15~25 mM 氯化钾、15~20 mM硫酸镁、15~20 mM硫酸铵、0.15~0.25% Tween
20、2.5~3.0 mM dNTPs和1.5~1.8 M 甜菜碱。
4..根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,所述反应液的配方为:每1L反应液中含有40 mM pH 8.8 的Tris-HCl、20 mM氯化钾、16 mM硫酸镁、20 mM硫酸铵、0.2%Tween 20、
2.8 mM dNTPs和1.6 M 甜菜碱。
5.根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,所述稳定液为甘油;所述的显色液为SYBR Green I或EvaGreen;所述阳性对照液为含有家蚕质型多角体病毒基因组第5片段核苷酸部分序列的重组质粒。
6.根据权利要求2或3所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系为:
25 μL RT-LAMP反应体系为:
反应液 12.5μL;
5pmol/μL CPVF2/CPVB2 0.5μL ;
40pmol/μL CPVFI2/CPVBI2 1μL ;
8U Bst DNA polymerase 0.8 μL ;
10U逆转录酶 0.2μL;
RNA 2 μL;
DEPC水 补充至25μL;
所述反应条件为:60℃~65℃水浴40~60 min;最后80~95℃,灭活2~10 min。
7.根据权利要求6所述试剂盒,其特征在于,所述反应条件为:63℃水浴60 min;90℃,灭活2 min。
8.一种利用权利要求1至7任一项所述试剂盒检测家蚕质型多角体病毒的方法,其特征在于,包括如下步骤: S1.提取待测样品RNA;
S2.配置RT-LAMP反应体系;向反应体系中加入稳定液进行RT-LAMP反应;
S5.反应结束后,向反应产物中加入显色液进行染色检测,显色为绿色判断结果为阳性,显色为橙色判断结果为阴性。