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专利号: 2013100093213
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种制备蓝圆鰺鱼肉蛋白抗氧化活性肽的方法,其特征在于以蓝圆鰺鱼肉蛋白为原料,采用枯草芽孢杆菌2709所产生的碱性蛋白酶水解,具体工艺为: (1)将蓝圆鰺鱼肉蛋白粉与水混合调成蛋白含量为I〜5wt%的反应原料液,然后加入0.002〜0.05wt%碱性蛋白酶,在45〜60°C及pH为7.5〜10下水解3〜6小时,最后加热至100°c灭酶得到酶解液; (2)将酶解液于4°C、8000r/min离心10〜15min,得到上清液并使用分子量为5000Da的超滤膜超滤分离收集渗透液; (3)以去离子水为流动相采用Sephedex G-15凝胶层析柱分离步骤2得到的渗透液,并用蛋白核酸检测仪于280nm处检测并测定各峰对应的洗脱液的抗氧化活性,收集高活性的2号吸收峰(见图1)组分并冻干得到冻干体; (4)将步骤3得到的冻干体用反相HPLC进一步分离,使用ODS柱(Hedera 0DS-C2,10X 250mm),采用含0.1%三氟乙酸的水和乙腈(0〜25〜60min内0〜21〜50%乙腈)为流动相线性洗脱,220nm波长下检测洗脱峰并收集测定各峰抗氧化活性,流速1.5mL ^irT1,根据检测谱图(见图2)收集活性最高的I号吸收峰对应的洗脱液;然后改用C18柱(Hypersil 0DS-C18,4.6 X 250mm)对I号吸收峰洗脱液进行再次纯化,洗脱梯度为40min内0〜20%乙腈,流速0.5mL ^irT1,根据检测谱图(见图3)分别收集较高活性的I号和2号吸收峰对应的洗脱液并冷冻干燥,即得二个抗氧化肽。

2.权利要求1所述的蓝圆鰺鱼肉蛋白抗氧化活性肽,其氨基酸序列分别为His-Asp-His-Pro-Val-Cys (组氨酸-天冬氨酸-组氨酸-脯氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)(其质谱见图4)和His-Glu-Lys-Val-Cys (组氨酸-谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)(其质谱见图5)。`