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专利号: 2012105282448
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种热稳定性提高的角蛋白酶,其特征在于在GenBank accession nos.JX504681公布的基因序列基础上,其成熟区的四个位点发生氨基酸突变,具体为N122Y,N160C,A193P,N217S。

2.一种获得权利要求1所述角蛋白酶的方法,其特征在于以GenBank accession nos.JX504681公布的基因为出发基因,将其成熟区的四个位点进行氨基酸的取代。

3.产权利要求1所述产角蛋白酶的基因工程菌或转基因细胞系。

4.权利要求3所述产角蛋白酶的基因工程菌的构建方法,其特征在于包括如下步骤:

1)采用化学全合成或PCR方法克隆编码权利要求1所述蛋白酶的基因kerTB;

2)将步骤1)获得的kerTB基因连接到大肠杆菌表达载体,得到重组表达载体;

3)将步骤2)获得的重组表达载体转化Bacillus subtilis WB600得到基因工程菌。

5.权利要求4所述的基因工程菌,其特征在于所述表达载体为pMA0911。

6.应用权利要求4所述基因工程菌发酵生产角蛋白酶的方法,其特征在于以产角蛋白酶基因工程菌为生产菌株,斜面活化制备种子后,以3%的接种量转入已优化的基本发酵培养基,于37℃、200rpm条件下培养24h。

7.权利要求6所述的方法,其特征在于基本发酵培养基组成为胰蛋白胨10g/L,酵母抽提物5g/L,NaCl10g/L,葡萄糖10g/L,0.1g/L MgSO4。