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专利号: 2012104541638
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种以葡萄糖为底物合成生松素的大肠杆菌工程菌,其特征在于表达生松素合成途径中的需要的关键酶系,所述酶系为3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶,分支酸变位酶,预苯酸脱水酶,苯丙氨酸脱氨酶,4-香桂酸:辅酶A连接酶,查尔酮合成酶,查尔酮异构酶,丙二酸转运酶以及丙二酸吸收酶。

2.权利要求1所述的大肠杆菌工程菌,其特征在于所述3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶基因核苷酸序列如Genbank:NC000913.2所示,所述分支酸变位酶和预苯酸脱水酶的基因核苷酸序列如Genbank:GQ303716,所述丙二酸转运的基因核苷酸序列如Genbank:AAC83455,所述丙二酸吸收酶的基因核苷酸序列如Genbank:AAC83457,所述苯丙氨酸脱氨酶的基因核苷酸序列如Genbank:DQ013364,所述4-香桂酸:辅酶A连接酶的基因核苷酸序列如Genbank:X13325,所述查尔酮合成酶的基因核苷酸序列如Genbank:AF233638,所述查尔酮异构酶的基因核苷酸序列如Genbank:M91079。

3.权利要求1或2所述工程菌的构建方法,其特征在于根据Genbank:NC000913.2,GQ303716,AAC83455,AAC83457,DQ013364,X13325,AF233638,M91079,分别采用化学全合成方法获得途径所需要的基因,克隆到表达载体后分别转化大肠杆菌Escherichia coli(BL21)后得到所述基因工程菌。

4.权利要求1所述工程菌应用于生松素的生产,其特征在于以权利要求1所述工程菌为出发菌株,接种到MOPS培养基中,500mL摇瓶装液25mL,于37℃、250rpm条件下培养

12-20h至菌株OD600达到1.0-2.0;然后加入25ml相同的MOPS培养基,加入IPTG、调节浓度为1mM,30℃,250rpm条件下继续培养60h。

5.根据权利要求书4所述的方法,其特征在于MOPS培养基组成为(g/L):葡萄糖5g,氯化铵4g,磷酸氢二钾0.3g,丙二酸2g,MOPS83.7g,N-{三(羧甲基)甲基}甘氨酸7.1668g,氯化铵5.1g,硫酸铁0.03g,硫酸钾0.5g,氯化镁1.1g,氯化钠29.2g,微量元素10ml,自来水定容至1L。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述微量元素采用ATCC BAA-2326的配方。