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专利号: 2012102725707
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.假单胞菌属HZN6(Pseudomonas sp.HZN6),保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:湖北省武汉市珞珈山武汉大学,保藏日期为2010年8月9日,保藏编号为CCTCC No:M2010196。

2.如权利要求1所述的假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用。

3.如权利要求2所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用,其特征在于所述的应用为:以尼古丁为底物,以无机盐培养液为反应介质,以假单胞菌属HZN6为降解菌,在

25~45℃、pH值为5.5~9.0的条件下反应8~15h使反应液中尼古丁的质量含量小于0.1%,达到降解尼古丁的目的。

4.如权利要求2所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用,其特征在于所述的应用为:将无机盐培养液与尼古丁混合,使尼古丁终浓度为100~3000mg/L,再加入含假单胞菌属HZN6的细胞悬液构成反应体系,在25~45℃、pH值为5.5~9.0的条件黑暗振荡培养至反应液中尼古丁的质量残留量小于0.1%;所述含假单胞菌属HZN6的细胞悬液加入量使反应

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体系中假单胞菌属HZN6终浓度为1×10~5×10 个/ml。

5.如权利要求3所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用,其特征在于所述的含假单胞菌属HZN6的细胞悬液的制备方法为:(1)斜面培养:将假单胞菌属HZN6接种于斜面培养基,25~45℃培养5~7天,获得菌体斜面;所述斜面培养基的终浓度组成为:酵母粉10g/L,蛋白胨5.0g/L,氯化钠10.0g/L,琼脂糖2.0g/L,溶剂为水;

(2)种子培养:从步骤(1)菌体斜面上挑取一接种环菌体接种至无机盐培养基中,

25~45℃培养5~7天,获得种子液;所述无机盐培养基终浓度组成为:每升培养液中含有NaCl 1g,K2HPO4 1.5g,KH2PO4 0.5g,(NH4)2SO41.5g,MgSO4 0.1g,1ml微量元素溶液,溶剂为水,自然pH值,121℃高压蒸汽灭菌20min后制得,其中每升微量元素溶液中含MnSO4·H2O

0.13g,ZnCl2 0.23g,CuSO4·H2O 0.03g,CoCl2·6H2O 0.42g,Na2MoO4·2H2O 0.15g,AlCl3·6H2O 0.05g,溶剂为水;

(3)扩大培养:将步骤(2)获得的种子液以体积浓度10~20%的接种量接种至LB液体培养基中,30℃、150rpm振荡养至对数生长期,获得菌液,将菌液离心,弃上清,沉淀用pH值为

7.0的磷酸缓冲液悬浮,获得含假单胞菌属HZN6的细胞悬液;所述LB液体培养基终浓度组成为:每升培养中含有酵母粉10g,蛋白胨5.0g,氯化钠10.0g,溶剂为水,自然pH值。

6.如权利要求5所述假单胞菌属HZN6在降解尼古丁中的应用,其特征在于所述的应用为:将无机盐培养液与尼古丁混合制成混合液,使尼古丁终浓度为200mg/L,再加入含假单胞菌属HZN6的细胞悬液构成反应体系,在30℃、pH7.0、150rpm条件下黑暗振荡培养8h,使反应液中尼古丁的质量残留量小于0.1%,达到降解尼古丁的目的;所述含假单胞菌属HZN6

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的细胞悬液的加入量使反应体系中假单胞菌属HZN6终浓度为1×10~5×10 个/ml。