1.一种制备长蛇鲻鱼肉蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的方法,其特征在于以长蛇鲻鱼肉蛋白为原料,采用枯草芽孢杆菌1398所产生的中性蛋白酶水解,具体工艺为:(1)往长蛇鲻鱼肉蛋白粉加水制成蛋白含量为2~5%的反应原料液;然后往反应原料液中,加入0.5~5%中性蛋白酶,在35~55℃及pH为6.0~7.5下水解2小时,最后加热至100℃灭酶5~20min得到酶解液;
(2)用分子量为5000Da的超滤膜将酶解液超滤,对超滤透过液以水为流动相通过Sephedex G-15凝胶层析柱进行分离,层析柱流出液用蛋白核酸检测仪在220nm处进行进行检测,根据检测谱图(见图1)收集3号吸收峰的流出液得到纯化液;
(3)以C18为色谱柱、水和乙腈为流动相以及220nm检测波长二极管阵列检测器监测,采用高效反相液相色谱对纯化液进行二次分离,其中第一次分离以流动相水和乙腈比-1例为95∶5-50∶50,流速0.5mL·min ,根据检测谱图(见图2)收集7号吸收峰的流出液;第二次对7号吸收峰流出液进行洗脱梯度分离,第一阶段的流动相水和乙腈比例为
95∶5-80∶20,维持时间为8min,第二阶段的流动相水和乙腈比例为80∶20-70∶30,-1维持时间为16min,二阶段流动相的流速均0.5mL·min ,根据检测谱图(见图3)收集2号吸收峰的流出液;最后对2号吸收峰流出液冷冻干燥即得血管紧张素转化酶抑制肽;
所述 长蛇 鲻鱼 肉蛋 白血 管紧 张素 转换 酶抑 制肽 的氨 基酸 序列 为Ser-Pro-His-Tyr-Arg(丝氨酸-脯氨酸-组氨酸-酪氨酸-精氨酸)。