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专利号: 2010101086073
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
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摘要:

权利要求书:

一株琼胶酶产生菌——玫瑰杆菌(Roseobacter sp.)zjut,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,武汉大学,430072,保藏编号:CCTCC No:M 209292,保藏日期2009年12月3日。

2.如权利要求1所述的玫瑰杆菌ζ jut,其特征在于:所述玫瑰杆菌zjut的菌落特征如 下:涂布或划线接种于平板培养基上生长迅速,28°C培养48h后长出圆形、湿润、乳白色、直 径约0. 3〜0. 5cm的菌落,并且在固体平板培养基菌落处形成凹陷;所述玫瑰杆菌zjut的 菌体特征如下:短杆菌,两端钝圆,大小为0. 5〜0. 7 μ mX 0. 8〜2. 4 μ m ;所述的玫瑰杆菌 zjut的生理生化特性如下:革兰氏染色阴性;氧化酶、过氧化氢酶、D-核糖、蔗糖、柠檬酸盐 和L-丝氨酸阳性;N-乙酰葡萄糖胺、丙-二酸盐、乙酸盐、D-甘露醇、L-丙氨酸、D-葡萄糖、 L-阿拉伯糖、麦芽糖、丙酸盐、辛二酸、L-丝氨酸、L-脯氨酸为阴性。

3.如权利要求1所述的玫瑰杆菌ζ jut,其特征在于所述玫瑰杆菌zjut的16s rRNA的 部分核苷酸序列如下:AGGGGGCGGCAGACTACACATGCAAGTCGAGCGAGACCTTCGGGTCTAGCGGCGGACG GGTGAGTAACGCGTGGGAACGTGCCCTTCTCTACGGAATAGTCCCGGGAAACTGGGTTTAATACCGTATACGCCCTT CGGGGGAAAGATTTATCGGAGAAGGATCGGCCCGCGTTAGATTAGGTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGCCTA CGATCTATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCA GTGGGGAATCTTAGACAATGGGGGCAACCCTGATCTAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCTTAGGGTCGTAAAG CTCTTTCGCTGGGGAAGATAATGACTGTACCCAGTAAAGAAACCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATA CGGAGGGGGTTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGCGGATTGGAAAGTTGGGGGTGAAATCC CGGGGCTCAACCTCGGAACTGCCTCCAAAACTCCCAGTCTTGAGTTCGAGAGAGGTGAGTGGAACTCCGAGTGTAGA GGTGAAATTCGTAGATATTCGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGAIACTGACGCTGAGGTGCGA AAGTGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACCGTAAACGATGAATGCCAGTCGTCGGCAAGCAT GCTTGTCGGTGACACACCTAACGGATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATT GACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAACCCTTGACATC CTCGGACCGCCAGAGAGATCTGGTTTTCACTTCGGTGACCGAGTGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGT CGTGAGATGTTCGGTTAAGTCCGGCAACGAGCGCAACCCACATCTTCAGTTGCCAGCAGTTCGGCTGGGCACTCTGG AGAAACTGCCCGTGATAAGCGGGAGGAAGGTGTGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGTTGGGCTACACA CGTGCTACAATGGCAGTGACAATGGGTTAATCCCAAAAAACTGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCC ATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGTAACAGCATGACGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCG TCACACCATGGGAGTTGGTTCTACCCGACGACGCTGCGCTAACCTTCGGGGGGCAGGCGGCCAGGGTAGGATCAGGG ACTGGGGTGAAGTCGAAACAAGGAGCCCAAAGGCCCCA。

4.如权利要求1所述的玫瑰杆菌zjut在发酵制备琼胶酶中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述的应用为:将玫瑰杆菌zjut菌种接种至 以琼胶为唯一碳源的液体产酶培养基中,25〜35°C培养45〜55h,获得含有琼胶酶的发酵 液。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于应用方法如下:(1)将玫瑰杆菌zjut菌种接种于斜面培养基,于25〜30°C培养24〜48h,得到活化 后的玫瑰杆菌zjut菌种;所述的斜面培养基组成为:琼脂15〜25g/L,酵母浸出粉3〜5g/ L, NaCl 10 〜25g/L, MgSO4 · 7H20 4 〜6g/L ;KCl 1 〜2g/L, FeSO4 · 7H20 0. 01 〜0. 03g/L, CaCl2O. 1 〜0. 3g/L, NaH2PO4O. 5 〜1. Og/L,溶剂为水,pH 6. 8 〜7. 2 ;(2)将步骤(1)活化培养后玫瑰杆菌zjut菌体接种至液体种子培养基中,于25〜 35°C、150〜250r/min振荡条件下培养16〜24h,得到种子液;所述液体种子培养基组成 为:琼脂 1 〜3g/L,酵母浸出粉 3 〜6g/L,NaCl 10 〜25g/L,FeSO4 · 7H20 0. 01 〜0. 03g/ L, NaH2PO4O. 5 〜1. Og/L,溶剂为水,pH 6. 8 〜7. 2 ;(3)将步骤(2)种子液以〜10%的体积比的接种量,移种到液体产酶培养基中,于 25〜30°C、150〜250r/min振荡条件下培养45〜55h,得到含琼胶酶的发酵液;所述液体产 酶培养基组成为:琼胶 1 〜3g/L,NaNO3 2 〜5g/L,NaCl 10 〜25g/L, NaH2PO4 0. 5 〜1. Og/ L, MgSO4 · 7H20 4 〜6g/L, KCl 1 〜2g/L, FeSO4 · 7Η20 0· 01 〜0. 03g/L, CaCl2 0· 1 〜0. 3g/ L, MnCl2 · 4H20 0· 1 〜0. 2g/L,溶剂为水,pH7 〜8 ;(4)将步骤(3)含琼胶酶的发酵液于4°C条件下离心或者过滤,分离除去菌体,所得清 液即为琼胶酶粗酶液。

7.如权利要求1〜3之一所述的玫瑰杆菌zjut在水解琼胶制备琼胶寡糖中的应用。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述的应用为:以玫瑰杆菌zjut经发酵培养 获得的琼胶酶为催化剂,以琼胶为反应底物,在PH 7. 0〜8. 0的缓冲液中、于30〜50°C下 进行水解反应,制得所述琼胶寡糖。

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