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专利号: 202510145591X
申请人: 广州石兴生物医药科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:授权未缴费
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2025-07-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种单克隆抗体,其特征在于,所述单克隆抗体为抗GSK3的单克隆抗体,其重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.一种诱导干细胞生成胰岛素分泌细胞的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

(1)干细胞的扩增与维护;

(2)内胚层的诱导,该步骤所用培养基包括权利要求1所述的单克隆抗体;

(3)胰岛素分泌细胞前体的诱导;

(4)胰岛素分泌细胞的成熟。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)干细胞的扩增与维护的具体步骤为:将人iPSCs复苏后,置于无血清的DMEM/F12培养基中扩增,每2~3天换液一次;待细胞生长至汇合度80%时,使用TrypLE酶解液进行细胞传代,确保细胞保持在无分化状态。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)内胚层的诱导的具体步骤为:待干细胞生长至汇合度70%时,更换含有DMEM/F12、1%胎牛血清、1%谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、0.5μM CHIR99021、50ng/ml单克隆抗体的培养基,以激活Wnt信号通路,诱导细胞向内胚层分化;继续培养3天,每天更换培养基。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(3)胰岛素分泌细胞前体的诱导的具体步骤为:过渡到新的分化培养基,包含DMEM/F12、2%胎牛血清、1%谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、100ng/mlActivinA和50ng/ml FGF10;继续培养4天,每天更换培养基。

6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(4)胰岛素分泌细胞的成熟的诱导的具体步骤为:进一步过渡到新的培养基,包含DMEM/F12、1%胎牛血清、1%谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、10ng/ml GLP-1、10mM尼古丁酰胺和20ng/ml HGF;继续培养7天,每天更换培养基,即得胰岛素分泌细胞。

7.一种诱导干细胞生成胰岛素分泌细胞的培养基,其特征在于,所述培养基包括内胚层诱导培养基、胰岛素分泌细胞前体诱导培养基、胰岛素分泌细胞成熟培养基,其中内胚层诱导培养基包括权利要求1所述的单克隆抗体。

8.根据权利要求7所述的培养基,其特征在于,所述内胚层诱导培养基为含有DMEM/F12、1%胎牛血清、1%谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、0.5μMCHIR99021、50ng/ml单克隆抗体的培养基。

9.根据权利要求7所述的培养基,其特征在于,所述胰岛素分泌细胞前体诱导培养基为包含DMEM/F12、2%胎牛血清、1%谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、100ng/mlActivinA和50ng/ml FGF10的培养基。

10.根据权利要求7所述的培养基,其特征在于,所述胰岛素分泌细胞成熟培养基为包含DMEM/F12、1%胎牛血清、1%谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、10ng/ml GLP-1、10mM尼古丁酰胺和20ng/ml HGF的培养基。