1.一种从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备微生物菌液:将两种微生物菌株活化后,分别接种到LB液体培养基中,35-37℃、180rpm-200rpm下培养10-12h,得到两种菌的种子液;
(2)将两种菌的种子液按照体积比1:1混合后,取10mL混合菌液接种到100mL液体发酵培养基中,混合培养24-36h,培养完成将发酵液于4℃-6℃冷冻离心收集沉淀,用无菌生理盐水洗涤沉淀,再离心得到菌体沉淀,加磷酸缓冲液制成OD(3)胆汁预处理:取动物胆汁,按照胆汁量体积添加粗酶液5-10mL/L,混合均匀,在35-37℃下,反应3-5h,得到预处理胆汁液;
(4)将预处理胆汁液中加入乙酸丁酯,混合均匀静置分层,取乙酸丁酯层,再加入碱液进行萃取,下层溶液用酸液调节pH为3-4,此时,胆酸类物质形成沉淀析出,过滤去除废水,收集固体,水洗干燥,得鹅去氧胆酸粗品;
(5)纯化:将得到的鹅去氧胆酸粗品,加入二氯甲烷,二氯甲烷用量与鹅去氧胆酸粗品的固液比为(9-11)mL:1g,升温搅拌,回流反应0.5-1小时,缓慢降温至0-5℃,搅拌结晶1-2小时,过滤,得鹅去氧胆酸精品;
步骤(1)所述两种微生物菌株分别为干酪乳杆菌和植物乳杆菌,所述干酪乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.8727,购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,原始保藏日期为2008年11月10日;所述植物乳杆菌的保藏编号为CGMCC No. 1.12974,原始保藏日期为2014年9月5日。
2.根据权利要求1所述从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,步骤(2)液体发酵培养基的组成为:蛋白陈6g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖10g、吐温80 0.5mL、Na
3.根据权利要求1所述从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,步骤(3)所述动物胆汁为鸡胆汁、猪胆汁和鸭胆汁中的一种或者几种。
4.根据权利要求3所述从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,步骤(3)所述动物胆汁为鸡胆汁。
5.根据权利要求1所述从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,步骤(4)所述碱液为氢氧化钠溶液或者碳酸氢钠溶液。
6.根据权利要求1所述从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,步骤(4)所述酸液为稀盐酸或稀硫酸。
7.根据权利要求1所述从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法,其特征在于,步骤(4)预处理胆汁液、乙酸丁酯、碱液的体积比为3:2:2。