欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 202211159069X
申请人: 苏州卫生职业技术学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 染料;涂料;抛光剂;天然树脂;黏合剂;其他类目不包含的组合物;其他类目不包含的材料的应用
更新日期:2025-03-30
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)采用包含氨水杨酸、5,10,15,20–四(4–羟基苯基)卟啉和4-巯基苯硼酸在内的原料,通过水热法合成碳量子点;

2)制备比率型荧光碳点配合物:

2-1)利用步骤1)得到的碳量子点制备碳点溶液;

2-2)将稀土金属离子M

3)制备羧基聚苯乙烯微球;

4)将步骤2)得到的比率型荧光碳点配合物修饰到步骤3)得到的羧基聚苯乙烯微球上,得到该比率型荧光探针;

其中,M

2.根据权利要求1所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤1)具体包括:

1-1)将氨水杨酸、5,10,15,20–四(4–羟基苯基)卟啉、4-巯基苯硼酸加入乙醇和水的混合溶液中,超声,得到混合物;

1-2)将步骤1-1)得到的混合物转移到水热反应釜中,150-230℃下反应8-24h;

1-3)反应结束后冷却至室温,产物离心,离心液先用滤膜过滤,得到的滤液用截留分子量为500-1000Da的透析袋透析12-48h,收集透析袋内的透析液,冷冻干燥,得到碳量子点。

3.根据权利要求2所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤2)具体包括:

2-1)将步骤1)制备的碳点加入超纯水中,搅拌,超声分散5-30min,制备得到碳点溶液;

2-2)制备稀土金属离子M

2-3)反应结束后冷却至室温,产物在2000-6000rpm下离心1-5min,固体产物真空干燥,得到M与碳量子点的配合物,即所述比率型荧光碳点配合物。

4.根据权利要求3所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,其中,M

2-1)将步骤1)制备的碳点加入超纯水中,搅拌,超声分散5-30min,制备得到碳点溶液;

2-2)将Tb(NO

2-3)反应结束后冷却至室温,产物在2000-6000rpm下离心1-5min,固体产物真空干燥,得到Tb与碳量子点的配合物,即所述比率型荧光碳点配合物。

5.根据权利要求4所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,其中,所述碱溶液为氢氧化钠溶液或氨水。

6.根据权利要求1所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤3)具体包括:

3-1)制备聚苯乙烯微球:

3-1-1)将PVP溶解于无水乙醇中,搅拌均匀,通入N

3-1-2)将AIBN加入苯乙烯中,搅拌均匀,通入N

3-1-3)将混合物A和B混合,搅拌均匀,于40-65℃下反应5-45min,然后升高温度至68-95℃,聚合反应6-24h;

3-1-4)反应结束后离心,将离心得到的固体产物用乙醇和去离子水依次清洗,干燥过夜,得到聚苯乙烯微球;

3-2)聚苯乙烯微球表面羧基化包覆:

3-2-1)将聚苯乙烯微球分散在十二烷基硫酸钠溶液中;

3-2-2)向步骤3-2-1)得到的混合物中加入过硫酸钠、十一烯酸的乙醇溶液和二乙烯基苯的甲醇溶液,搅拌均匀,超声3-25min;

3-2-3)于55-90℃下反应3-10h,反应结束后离心,离心得到的固体产物用乙醇和水依次清洗,干燥,得到羧基聚乙烯微球。

7.根据权利要求6所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,步骤4)具体包括:

4-1)将步骤2)制得的比率型荧光碳点配合物加入去离子水中,超声分散,制备成荧光碳点配合物溶液;

4-2)向荧光碳点配合物溶液中加入1,3-二环己基碳二亚胺;

4-3)取步骤3)制得的羧基聚乙烯微球加入到步骤4-2)得到的混合液中,40-75℃下,搅拌反应6-16小时,反应结束后离心,离心得到的固体产物用去离子水洗涤,真空干燥,得到该比率型荧光探针。

8.根据权利要求7所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,利用该比率型荧光探针进行核酸扩增产物检测的方法为:Ⅰ、将比率型荧光探针加入去离子水中,搅拌均匀,配制成探针溶液;

Ⅱ、将步骤Ⅰ得到的探针溶液加入到待测样品进行核酸扩增反应后的产物中,搅拌均匀得到检测混合液,静置3-20min;

Ⅲ、利用波长为385nm的激发光源照射步骤Ⅱ得到的检测混合液,测量检测混合液在582nm处的黄色荧光强度I

9.根据权利要求8所述的用于核酸扩增产物检测的比率型荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤Ⅲ中,标准曲线fa、将比率型荧光探针加入去离子水中,搅拌均匀,配制成探针溶液;

b、根据要检测的目标物,预先一系列浓度的若干份体积均为V的目标物标准溶液,然后将每份目标物标准溶液于相同条件下分别进行核酸扩增;

c、完成核酸扩增后,在得到的每份扩增产物中分别加入等体积、等浓度的探针溶液,搅拌均匀得到检测混合液,静置3-20min;

d、对于每一份检测混合液,测量其在385nm的激发光下,582nm处的荧光强度I