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专利号: 2022110628721
申请人: 久美成立
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2025-12-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种可美白祛斑的油包水纳米乳包含香水莲花和菟丝子提取物和自合成多肽,其特

征在于制作方法具体包括如下步骤:S1、制备香水莲花提取物:分别取晒干后的香水莲花花瓣,去除虫害、霉变部分后粉碎,过50目筛,按照1 g∶20mL料液质量体积比,分别用蒸馏水、体积分数20%、40%、60%、80%、100%的丙酮溶液(体积比)在25℃温度下超声60min,所得溶液9 

000 r/min离心10min,取上清液过滤,再重复离心步骤3次,再经减压旋蒸除去丙酮,在冷冻干燥机中冻干24 h,得到香水莲花花瓣提取物粉末(多糖),测定时将其与菟丝子提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用;S2、制备菟丝子提取物:称取10g净制菟丝子药材,置于研钵中,将所有菟丝子捣碎后装袋待用,称取上述捣碎的菟丝子5g,置于坩埚内,用酒精灯加热直至表面微黄且有爆裂声,取出放凉,密闭保存备用,称取上述菟丝子1 g,加60%乙醇100 mL,水浴回流提取2次,每次60min,抽滤,浓缩蒸干,得菟丝子提取物(多糖和黄酮),测定时将其与香水莲花提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用;S3、蛋白多肽的合成:4倍过量的Fmoc‑氨基酸经过4倍过量的活化剂(HBTU)和6倍过量的N,N‑二异丙基乙胺活化后进行缩合反应;每步缩合反应结束后,用N,N二甲基甲酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)各洗涤三次;然后20%哌啶(DMF),脱去Fmoc保护基;重复缩合反应和脱保护步骤,直至完成目标多肽序列(Pro‑Ser‑Gly)(2 Asn‑Glu‑Gly)(2 Pro‑Ser‑Gly)2的合成;目标序列(Pro‑Ser‑Gly)(2 Asn‑Glu‑Gly)(2 Pro‑Ser‑Gly)2合成结束后,需要用25%的乙酸酐(DMF)溶液,对N端封端20分钟;将多肽从树脂上切割下来,切割液配比为TFA:TIS:H2O=90:3:7,切割时间为

6小时;然后用无水乙醚沉淀多肽并离心,弃上清留沉淀,醚洗3次,得到目标粗肽;然后将粗肽通过C18反相高相液相色谱柱纯化,通过质谱确认目标产物,最终得到多肽(Pro‑Ser‑Gly)(2 Asn‑Glu‑Gly)(2 Pro‑Ser‑Gly)2;S4、创建缺水性黑色素瘤小鼠模型:本发明使用小鼠的动物实验许可证号为gdpulac2015595,购自于南方医科大学动物实验中心,小鼠的体重约为20±2g,实验前,所有小鼠适应性喂养一周,保证其自由饮食,将所有小鼠置于干燥环境中喂养,并向小鼠照射不同强度的紫外线,增强小鼠体内黑色素瘤的产生;S5、降低小鼠体内黑色素:称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液(PH=7),20ml的去离子水配制成的样品液,随后进行提取乳化,乳化后产物与S3中合成的多肽一块制得一种油包水纳米乳,从 S4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中,对细胞进行前期培养24h后,加入稀释后的油包水纳米乳,继续培养,定期测定细胞内黑色素含量;S6、锁住小鼠皮肤表面的水分:称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液(PH=7),20ml的去离子水配制成的样品液,随后进行提取乳化,乳化后产物与S3中合成的多肽一块制得一种油包水纳米乳,从 S4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中,对细胞进行前期培养24h后,加入稀释后的油包水纳米乳,继续培养,定期测定细胞保湿率。

2.根据权利要求1所述的一种可美白祛斑的油包水纳米乳,其特征在于:所述步骤S1

中,香水莲花提取物主要成分为多糖。

3.根据权利要求1或2所述的一种可美白祛斑的油包水纳米乳,其特征在于:所述步骤

S1中,香水莲花提取物能抑制络氨酸酶的活性,降低黑色素的被转化率。

4.根据权利要求1所述的一种可美白祛斑的油包水纳米乳,其特征在于:所述步骤S2

中,菟丝子提取物主要成分为多糖和黄酮。

5.根据权利要求1或4所述的一种可美白祛斑的油包水纳米乳,其特征在于:所述步骤

S2中,菟丝子提取物与香水莲花提取物起协同作用。

6.根据权利要求1所述的一种可美白祛斑的油包水纳米乳,其特征在于:所述步骤S1

中,香水莲花提取物主要是提取的花瓣。