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专利号: 2022107485582
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R,其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1中所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R相关的生物材料,其特征在于:为下述生物材料中的任意一种:

1)编码所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的核酸分子;

2)含有1)中所述核酸分子的表达盒;

3)含有1)中所述核酸分子的重组载体,或含有2)中所述表达盒的重组载体;

4)含有1)中所述核酸分子的重组微生物,或含有2)中所述表达盒的重组微生物,或含有3)中所述重组载体的重组微生物。

3.根据权利要求2所述的生物材料,其特征在于:

1)中所述核酸分子为所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因序列,如SEQ ID NO:1所示,或者是所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的CDS序列,如SEQ ID NO:2所示。

4.权利要求1中所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的应用,其特征在于:为下述应用中的任意一种或多种组合:ⅰ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在下调荔枝霜疫霉致病力中的应用;

ⅱ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在抑制荔枝霜疫霉生长中的应用;

ⅲ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在抑制荔枝霜疫霉卵孢子形成中的应用;

ⅳ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在降低荔枝霜疫霉在胁迫环境下的耐受性中的应用;

ⅴ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在防治荔枝霜疫病中的应用;

ⅳ)中所述的胁迫环境为细胞壁胁迫或高渗胁迫;

所述的细胞壁胁迫为十二烷基硫酸钠、刚果红或荧光增白剂诱导的细胞壁胁迫;

所述的高渗胁迫为NaCl、CaCl2或山梨醇诱导的高渗透压胁迫。

5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:

‑1 ‑1 ‑1

所述的细胞壁胁迫为25 μg∙mL 十二烷基硫酸钠、350 μg∙mL 刚果红或100 μg∙mL 荧光增白剂诱导的细胞壁胁迫;

‑1  ‑1 ‑1

所述的高渗胁迫为0.05 mol∙L NaCl,0.1 mol∙L  CaCl2或0.2 mol∙L 山梨醇诱导的高渗透压胁迫。

6.一种防治由荔枝霜疫霉导致的荔枝霜疫病的方法,其特征在于:通过抑制或阻断权利要求1中所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达实现。

7.一种PlMYB1R基因敲除的突变体的构建方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)根据权利要求1中所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因序列利用sgRNA网站设计sgRNA,将sgRNA与pYF2.3G‑Ribo‑sgRNA载体进行连接,得到PlMYB1R基因敲除质粒pYF2.3G‑Ribo‑sgRNA::PlMYB1R;

或者,根据PlMYB1R基因序列上游、下游各1kb的序列设计左、右同源臂扩增引物,以荔枝霜疫霉基因组DNA为模板扩增左右同源臂,与pBSSK载体进行连接,得到PlMYB1R基因敲除质粒pBSSK::PlMYB1R;所述的左、右同源臂扩增引物分别如下所示:左同源臂扩增引物:

PlMYB1R‑Left‑F:5'‑TAGAACTAGTGGATCCCCCGTGCTCAATATCTTCGTGCGTG‑3';

PlMYB1R‑Left‑R:5'‑TTAGTCTCAGAAAATTCAGCCCCCAATATAAGCAAGAC‑3';

右同源臂扩增引物:

PlMYB1R‑Right‑F:5'‑AGAAAATTCAGCCCCCAATATAAGCAAGACATCAGTCAG‑3';

PlMYB1R‑Right‑R:5'‑ATGCGTCCGAGCGAGGTAGGGCTGCAGGAATTCGATA‑3'(2)将PlMYB1R基因敲除质粒pYF2.3G‑Ribo‑sgRNA::PlMYB1R或pBSSK::PlMYB1R导入荔枝霜疫霉野生型菌株的原生质体内,经筛选、验证,获得PlMYB1R基因敲除的突变体。

8.根据权利要求7所述的构建方法,其特征在于:

步骤(1)中所述的sgRNA如下任意一种序列所示:

sgRNA1:5'‑CAACTACCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACGAGTAAGCTCGTCGTAGTTGCCCTAATGGATAG‑3' ;

sgRNA2:5'‑CTCGTTGCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACGAGTAAGCTCGTCCAACGACAGCAGAATGGATG‑3'。