1.一种荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R,其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.权利要求1中所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R相关的生物材料,其特征在于:为下述生物材料中的任意一种:
1)编码所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的核酸分子;
2)含有1)中所述核酸分子的表达盒;
3)含有1)中所述核酸分子的重组载体,或含有2)中所述表达盒的重组载体;
4)含有1)中所述核酸分子的重组微生物,或含有2)中所述表达盒的重组微生物,或含有3)中所述重组载体的重组微生物。
3.根据权利要求2所述的生物材料,其特征在于:
1)中所述核酸分子为所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因序列,如SEQ ID NO:1所示,或者是所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的CDS序列,如SEQ ID NO:2所示。
4.权利要求1中所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的应用,其特征在于:为下述应用中的任意一种或多种组合:ⅰ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在下调荔枝霜疫霉致病力中的应用;
ⅱ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在抑制荔枝霜疫霉生长中的应用;
ⅲ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在抑制荔枝霜疫霉卵孢子形成中的应用;
ⅳ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在降低荔枝霜疫霉在胁迫环境下的耐受性中的应用;
ⅴ)抑制或阻断所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达在防治荔枝霜疫病中的应用;
ⅳ)中所述的胁迫环境为细胞壁胁迫或高渗胁迫;
所述的细胞壁胁迫为十二烷基硫酸钠、刚果红或荧光增白剂诱导的细胞壁胁迫;
所述的高渗胁迫为NaCl、CaCl2或山梨醇诱导的高渗透压胁迫。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:
‑1 ‑1 ‑1
所述的细胞壁胁迫为25 μg∙mL 十二烷基硫酸钠、350 μg∙mL 刚果红或100 μg∙mL 荧光增白剂诱导的细胞壁胁迫;
‑1 ‑1 ‑1
所述的高渗胁迫为0.05 mol∙L NaCl,0.1 mol∙L CaCl2或0.2 mol∙L 山梨醇诱导的高渗透压胁迫。
6.一种防治由荔枝霜疫霉导致的荔枝霜疫病的方法,其特征在于:通过抑制或阻断权利要求1中所述荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因表达实现。
7.一种PlMYB1R基因敲除的突变体的构建方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)根据权利要求1中所述的荔枝霜疫霉致病相关蛋白PlMYB1R的基因序列利用sgRNA网站设计sgRNA,将sgRNA与pYF2.3G‑Ribo‑sgRNA载体进行连接,得到PlMYB1R基因敲除质粒pYF2.3G‑Ribo‑sgRNA::PlMYB1R;
或者,根据PlMYB1R基因序列上游、下游各1kb的序列设计左、右同源臂扩增引物,以荔枝霜疫霉基因组DNA为模板扩增左右同源臂,与pBSSK载体进行连接,得到PlMYB1R基因敲除质粒pBSSK::PlMYB1R;所述的左、右同源臂扩增引物分别如下所示:左同源臂扩增引物:
PlMYB1R‑Left‑F:5'‑TAGAACTAGTGGATCCCCCGTGCTCAATATCTTCGTGCGTG‑3';
PlMYB1R‑Left‑R:5'‑TTAGTCTCAGAAAATTCAGCCCCCAATATAAGCAAGAC‑3';
右同源臂扩增引物:
PlMYB1R‑Right‑F:5'‑AGAAAATTCAGCCCCCAATATAAGCAAGACATCAGTCAG‑3';
PlMYB1R‑Right‑R:5'‑ATGCGTCCGAGCGAGGTAGGGCTGCAGGAATTCGATA‑3'(2)将PlMYB1R基因敲除质粒pYF2.3G‑Ribo‑sgRNA::PlMYB1R或pBSSK::PlMYB1R导入荔枝霜疫霉野生型菌株的原生质体内,经筛选、验证,获得PlMYB1R基因敲除的突变体。
8.根据权利要求7所述的构建方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的sgRNA如下任意一种序列所示:
sgRNA1:5'‑CAACTACCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACGAGTAAGCTCGTCGTAGTTGCCCTAATGGATAG‑3' ;
sgRNA2:5'‑CTCGTTGCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACGAGTAAGCTCGTCCAACGACAGCAGAATGGATG‑3'。