1.一种薄层培养获得大花君子兰体细胞胚的方法,其特征在于:以大花君子兰无菌组培苗的根为材料,在双目显微镜下,将离体根横向切成1.0 2.0 mm大小的薄片,接种于MS + ~
2.0 mg/L PIC培养基中,完全黑暗条件下培养45 60天后,诱导产生球形胚;将球形胚转移~到MS培养基中,光下培养2周后球形胚萌发,最终发育成根、芽同步发育的大花君子兰无菌小植株,再以无菌小植株的根为材料,循环培养并再生小植株;
所述大花君子兰无菌组培苗的根是指:再生8周内、直径不超过0.4 cm的不定根。
2.根据权利要求1所述的薄层培养获得大花君子兰体细胞胚的方法,其特征在于,获取大花君子兰无菌组培苗的根的方法,包括以下步骤:愈伤组织诱导步骤:
君子兰种子灭菌后,剥去胚乳,取出种胚,转移到MS + 1.0 mg/L PIC的培养基中,完全黑暗条件下培养;50 60天,外植体表面形成初生愈伤组织,接种90天,初生愈伤组织颜色变~淡前,进行继代培养;
器官型愈伤组织培养步骤:
将初生愈伤组织切去褐化部分和外植体后,转接于MS + 0.5 mg/L NAA + 0.5 mg/L TDZ培养基中,完全黑暗条件培养;培养过程中初生愈伤组织出现褐变时,需及时切去褐化部分和黄白色非胚性愈伤组织,并进行转接,根据转接后愈伤组织生长状态,调整转接周期,经过连续三次以上转接后,褐化程度逐渐减轻,直至愈伤组织状态以颗粒状、淡黄绿色器官型胚性愈伤组织为主时停止;
不定根TCL外植体的培养步骤:
3
将器官型胚性愈伤组织,切割成1 2 cm 大小,转移至MS + 0.5 mg/L NAA + 2.0 mg/L ~
6‑BA培养基中,光照条件下培养60 70d后,愈伤组织分化不定芽;将具有2 4片展开叶片的~ ~试管苗,切去基部棕红色愈伤组织后,转移到1/2 MS + 0.5 mg/L NAA培养基上,2 4周后芽~苗长出2 3条根;继续培养3 4周,大花君子兰无菌组培苗的根长至2 4cm时,即可作为TCL培~ ~ ~养的外植体材料。