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专利号: 2022106446877
申请人: 沈阳农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种薄层培养获得大花君子兰体细胞胚的方法,其特征在于:以大花君子兰无菌组培苗的根为材料,在双目显微镜下,将离体根横向切成1.0~2.0  mm大小的薄片,接种于MS  + 2.0  mg/L  PIC培养基中,完全黑暗条件下培养45~60天后,诱导产生球形胚;将球形胚转移到MS培养基中,光下培养2周后球形胚萌发,最终发育成根、芽同步发育的大花君子兰无菌小植株,再以无菌小植株的根为材料,可循环培养并再生小植株。2.根据权利要求1所述薄层培养获得大花君子兰体细胞胚的方法,其特征在于:所述大花君子兰无菌组培苗的根是指:再生8周内、直径不超过0.4  cm的不定根。3.根据权利要求1所述的薄层培养获得大花君子兰体细胞胚的方法,其特征在于,获取大花君子兰无菌组培苗的根的方法,包括以下步骤:愈伤组织诱导步骤:君子兰种子灭菌后,剥去胚乳,取出种胚,转移到MS  +  1.0  mg/L  PIC的培养基中,完全黑暗条件下培养;50~60天,外植体表面形成初生愈伤组织。接种90天,初生愈伤组织颜色变淡前,进行继代培养;器官型愈伤组织培养步骤:将初生愈伤组织切去褐化部分和外植体后,转接于MS  +  0 .5  mg/L  NAA  +  0 .5  mg/L TDZ培养基中,完全黑暗条件培养;培养过程中初生愈伤组织出现褐变时,需及时切去褐化部分和黄白色非胚性愈伤组织,并进行转接,根据转接后愈伤组织生长状态,调整转接周期,经过连续三次以上转接后,褐化程度逐渐减轻,直至愈伤组织状态以颗粒状、淡黄绿色器官型胚性愈伤组织为主时停止;不定根TCL外植体的培养步骤:将器官型胚性愈伤组织,切割成1~2  cm3大小,转移至MS  +  0.5  mg/L  NAA  +  2.0  mg/L 6‑BA培养基中,光照条件下培养60~70d后,愈伤组织分化不定芽;将具有2~4片展开叶片的试管苗,切去基部棕红色愈伤组织后,转移到1/2  MS  +  0.5  mg/L  NAA培养基上,2~4周后芽苗长出2~3条根;继续培养3~4周,大花君子兰无菌组培苗的根长至2~4cm时,即可作为TCL培养的外植体材料。

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