1.一种小叶桢楠组织培养育苗方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)外植体的选择和处理:选取无病虫害野生植株的当年枝条上的幼嫩叶,消毒后切割成大小为0.5cm*0.5cm的方块,选取叶片部位带有叶缘、叶肉、叶脉或叶基部的方块为作为培养的外植体;
(2)愈伤组织的培养:将步骤(1)的外植体接入愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织培养,得到愈伤组织;所述的诱导培养基为改良MS母液+0.5‑1.5mg/L的BA+0.1‑0.5mg/L的NAA+0.005‑0.015μg/L的油菜素内酯;
(3)芽诱导培养:将步骤(2)培养得到的愈伤组织接入芽诱导培养基中进行芽诱导培养,得到组培芽;所述的芽诱导培养基为改良MS母液+1.5‑2.5mg/L的BA+0.8‑1.5mg/L的NAA+0.003‑0.006μg/L异戊烯腺嘌呤+0.005‑0.015μg/L的油菜素内酯;
(4)增殖培养:将步骤(3)的组培芽切割成芽丛或带腋芽茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养,得到芽苗;每瓶接种芽丛或茎段不少于5个,每个芽丛芽数不少3个,继代培养代数控制在10代内,培养室的温度控制在23℃±2℃,光照强度为1300~1500lx,光照时间为每天10~12h;所述的增殖培养基为改良MS母液+1.0‑2.0mg/L的BA+1.0‑1.8mg/L的NAA+
0.01‑0.015μg/L异戊烯腺嘌呤+0.01‑0.025μg/L的油菜素内酯;
(5)生根培养:将步骤(4)的芽苗接入生根培养基中进行生根培养,得到组培苗;所述的生根培养基为改良MS母液+1.8‑2.5mg/L的BA+1.5‑2.5mg/L的NAA;
(6)移栽炼苗:将步骤(5)的组培苗除去培养基后移栽入基质中,进行炼苗,炼苗完成后得到小叶桢楠幼苗;
所述改良MS母液是指在MS培养基的基础上更改了部分组分和配比的培养基;所述的更改包括:调整MS培养基中KNO3的浓度为1500mg/L,调整NH4NO3的浓度为550mg/L,调整蔗糖的浓度为25g/L,调整琼脂的浓度为7g/L,调整pH值为6.0;添加800mg/L的NaH2PO4和1.4mg/L的泛酸钙。
2.根据权利要求1所述的育苗方法,其特征在于,步骤(1)中所述的消毒方法为将清洁后的幼嫩叶置于消毒剂中浸泡2~5min,再用0.1%的升汞溶液消毒1~3min后,用无菌水冲洗5~8次,并用无菌滤纸擦干其表面水分;所述的消毒剂为pH值5.0~6.5、有效氯素浓度10~30mg/L的消毒剂。
3.根据权利要求1所述的育苗方法,其特征在于,步骤(2)愈伤组织的培养条件为:在20~25℃条件下,暗培养3~7天后,再转为光培养7‑10d,所述光培养的光照强度1800~
2400lx,光照时间11~12h/d。
4.根据权利要求1所述的育苗方法,其特征在于,步骤(3)芽诱导的培养条件为:光照条件下培养温度为22‑25℃,非光照条件下培养温度为12‑18℃,光照强度为1000‑1400Lux,光照时间为8‑10h/d。
5.根据权利要求1所述的育苗方法,其特征在于,步骤(5)生根培养的培养条件为:光照条件下培养温度为25‑28℃,非光照条件下培养温度为18‑23℃,光照强度为2200‑3000Lux,光照时间为11‑12h/d。