1.基于HRP扩增用于检测肺癌标志物CYFRA21-1光电免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）钒酸铋的制备

取0.06   0.15 g五水合硝酸铋和0.046   0.06 g正钒酸钠溶解于40   60 mL水中，~ ~ ~超声20   50 min之后混合溶液转入反应釜中，于160 180 °C下反应8   12 h，反应冷却~ ~ ~至室温后，用无水乙醇和超纯水各洗涤3次，真空干燥获得产品粉末；

（2）钒酸铋-钒酸银复合物的制备

取0.3   0.25 g所制备的二氧化铈溶解于50   80 mL水中，之后加入0.1   0.2 g硝~ ~ ~酸银搅拌30   50 min后，将0.044 0.05g正钒酸钠溶解于50mL水中搅拌2 h后将此溶液缓~ ~慢加入上述钒酸铋溶液中，黑暗条件下搅拌3 5h，用无水乙醇和超纯水各洗涤3次后，于40 ~ 60°C下真空干燥10   14 h；

~ ~

（3）硫化锡的制备

取0.3   0.5g硫代乙酰胺和0.7   1.0 g五水合四氯化锡溶解于50   100 mL异丙醇~ ~ ~溶液中，搅拌30 min后转移到100 mL高压釜中，在180℃温度下反应18   24 h，冷却至室温~用超纯水和乙醇洗涤5   8次，最后将样品置于80℃的真空环境中烘干12 h得到最终产品；

~

（4）二氧化硅的制备

60   80 mL无水乙醇与2   5 mL超纯水混合形成透明溶液，后加入5   10 mL硅酸四~ ~ ~乙酯，继续以2 mL/min的速度加入10   30 mL、质量分数为10 %   30 %的氨水，于20   50 ~ ~ ~°C下搅拌 3   6 h后，离心，用无水乙醇和超纯水洗涤产品至中性，于30   50°C真空干燥~ ~

10   14 h，制得二氧化硅材料；

~

（5）HRP - 二氧化硅 - CYFRA21-1二抗复合物的制备取2   4 mL APTES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）和1   2 g制备的二氧化硅加入100   ~ ~ ~

200 mL无水甲苯中，溶液超声20   30 min后，将该溶液置于80   100°C下搅拌20   24小~ ~ ~时，然后用乙醇和超纯水离心洗涤至中性，最后产品于40   60°C下干燥过夜，得到胺化的~二氧化硅粉末；

取1   2 mL的5 mg/mL胺化的二氧化硅加入到0.5   1.0 mL质量分数为2.5 %的戊二~ ~醛中，室温下搅拌6小时，离心后用pH为7.4的PBS洗涤除去戊二醛，然后将离心后的产品溶于1 mL、pH为7.4的PBS中并加入200   400 μg/mL的CYFRA21-1二抗和200   400 μL浓度为~ ~

1   5 mg/mL的HRP，将溶液于37°C下剧烈震荡1小时，并离心洗涤，将洗涤后得到的产品分~散于2 mL、pH为7.4的PBS溶液中，同时加入50   80 μL质量分数为1   3 %的BSA溶液（pH为~ ~

7.4的PBS缓冲液配置），以此来封闭非特异性活性位点，然后在室温下剧烈振荡1小时，离心并洗涤，最后将离心后得到的产品分散于5 mL、pH为7.4的PBS溶液中，并于4 °C下保存；

（6）HRP – 酪胺的制备

取1   3 mL HRP溶液溶于3   5 mL N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸钠（pH=9.3）后振荡~ ~

5 min，用3 M的盐酸溶液调整pH为7.3   8.0，然后加入30   50 mg NHS和40   60 mg ~ ~ ~EDC，振荡45min后加入1.2   3mL的酪胺（5 mg/mL），在室温下振荡12   18 h，最后在4℃下~ ~离心并使用PBS洗涤2次，分散于5   8 mL PBS中并置于4℃冰箱中保存；

~

（7）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗衣粉、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）依次取10 µL、8   12 mg/mL的钒酸铋-钒酸银复合物和硫化锡的水溶液滴加到ITO~导电玻璃的导电面，红外灯下晾干；

3）在修饰电极表面，继续滴加体积比为1:1的10   30 mg/mL 1-乙基-(3-二甲基氨基~丙级)碳二亚胺盐酸盐和10   30 mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺的混合液8   12 μL；

~ ~

超纯水冲洗电极表面，室温下自然晾至湿润薄膜状态；

4）滴加10 µL、5   20 μg/mL的CYFRA21-1捕获抗体，PBS清洗，室温下自然晾至湿润薄~膜状态；

5）滴加10 µL、用PBS缓冲溶液配制的质量分数为1   3%的牛血清白蛋白溶液于修饰电~极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

6）滴加10 µL、0.01 pg/mL   5 ng/mL用PBS缓冲溶液配制的CYFRA21-1抗原，超纯水冲~洗电极表面，4 ℃冰箱中自然晾干；

7）滴加10 µL、5   20 μg/mL带有HRP - 二氧化硅标记的CYFRA21-1检测抗体，超纯水~冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾至湿润薄膜状态；

8）滴加3 µL H2O2、7 µL HRP - 酪胺晾10 min；

9）将上面获得的材料浸泡于10 mM 4-1-萘酚和0.15 mM H2O2溶液中10   30 min获得~电极材料。

2.如权利要求1所述制备的光电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤如下：（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰传感器为工作电极，在含有0.01   0.5 mol/L的抗坏血酸的pH为~

5.0   8.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

~

（2）用时间-电流法对用PBS缓冲溶液依次稀释配制的CYFRA21-1特异性抗原标准溶液进行检测，设置电压为-0.1   0.1 V，运行时间120 s，光源波长为白色混合光源；

~

（3）电极放置好之后，每隔20 s开灯持续照射20 s，记录光电流，绘制工作曲线；

（4）将待测的CYFRA21-1抗原样品溶液代替CYFRA21-1抗原标准溶液进行检测。