1.一种黄颡鱼混合细菌灭活疫苗,其特征在于,所述疫苗包括以下灭活抗原组合物:温和气单胞菌灭活液、恶臭假单胞菌灭活液和类志贺邻单胞菌灭活液。
2.根据权利要求1所述黄颡鱼混合细菌灭活疫苗,其特征在于,所述温和气单胞菌灭活液、恶臭假单胞菌灭活液和类志贺邻单胞菌灭活液的比例为1:1:1,所述温和气单胞菌灭活液浓度为2 5×108 CFU/mL,所述恶臭假单胞菌灭活液浓度为2 5×108 CFU/mL,所述类志贺~ ~邻单胞菌灭活液浓度为2 5×108 CFU/mL。
~
3.根据权利要求1所述黄颡鱼混合细菌灭活疫苗的制备方法,其特征在于,具体制备步骤如下:(1)将温和气单胞菌NN156、恶臭假单胞菌NN157和类志贺邻单胞菌NN159分别接种在普通琼脂培养基上,28 ℃恒温培养16 h 24 h后;
~
(2)分别挑取3种细菌的单菌落置于营养肉汤培养基中,在28 ℃条件下200 rpm培养过
8-12 h;
(3)当细菌浓度达到0.8 1.5×109 CFU/mL时,于菌液中加入福尔马林至终浓度为0.5%,~
25 ℃灭活24 h后,期间每隔6 h充分搅动1次菌液;
(4)将已灭活的菌液在4℃、5000 rpm条件下离心10 15 min收集菌体沉淀,再用0.65%~无菌生理盐水洗涤并重悬3次,使用细菌浊度仪将灭活疫苗浓度调至为2 5×108 CFU/mL;
~
(5)将3种细菌的灭活疫苗按1:1:1的比例混匀后分装并置于4 ℃冰箱保存备用。
4.根据权利要求3所述黄颡鱼混合细菌灭活疫苗的制备方法,其特征在于,所述的菌液中加入福尔马林至终浓度为0.5%,所述的浓度为体积比浓度。
5.根据权利要求1或2所述黄颡鱼混合细菌灭活疫苗作为预防及治疗黄颡鱼病疫苗的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述混合细菌灭活疫苗采用肌肉注射的方式进行免疫或采用口服或浸泡的方式进行免疫。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述混合细菌灭活疫苗通过黄颡鱼腹腔注射的方式免疫黄颡鱼。