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专利号: 2020108099171
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-08-24
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种印迹脂肪酶,其特征在于所述印迹脂肪酶按如下方法制备:将脂肪酶溶解在pH为6.5‑8.5缓冲液中,超声助溶,使脂肪酶充分溶解,有不溶成分则过滤去除,得到脂肪酶酶液;向脂肪酶酶液中,加入脂肪酸、糖醇,搅拌使其混合均匀,调节混合酶液pH为6.5‑8.5,在

20‑30℃恒温下,以120‑160转/分钟的速度搅拌10‑25分钟后,立刻加入大孔树脂,在25‑35℃恒温、60‑100转/分钟下搅拌吸附3‑6h,过滤,获得滤液和滤饼;滤饼用蒸馏水洗涤后,真空干燥,获得印迹脂肪酶;所述脂肪酸为C10‑C18脂肪酸,所述糖醇为下列之一:山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇。

2.如权利要求1所述印迹脂肪酶,其特征在于所述超声助溶条件为:300W功率超声5分钟。

3.如权利要求1所述印迹脂肪酶,其特征在于所述脂肪酸为下列之一:油酸、癸酸、棕榈酸、硬脂酸、月桂酸。

4.如权利要求1所述印迹脂肪酶,其特征在于所述缓冲液为0.05 mol/L、pH7.5的磷酸钠缓冲液。

5.如权利要求1所述印迹脂肪酶,其特征在于所述缓冲液体积用量以脂肪酶重量计为

40‑100ml/g;所述脂肪酶酶液中脂肪酶与脂肪酸重量比为1:2‑ 4.5;所述脂肪酶酶液中脂肪酶与糖醇重量比为1:8‑23。

6.如权利要求1所述印迹脂肪酶,其特征在于所述大孔树脂的型号为下列之一:D4006、D3520、D1300;所述大孔树脂添加量与脂肪酶酶液中脂肪酶重量比为20 55:1。

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7.如权利要求1所述印迹脂肪酶,其特征在于所述大孔树脂在加入前先进行预处理,所述预处理方法为:将大孔树脂置于烧杯中,加入体积浓度95%乙醇水溶液,于室温、150r/min的条件下震荡洗涤24小时,并于中途两次更换体积浓度95%乙醇水溶液,震荡结束后,每次用300ml蒸馏水洗涤五次,抽滤,滤液蒸馏回收乙醇,滤饼即为预处理后的大孔树脂;所述体积浓度95%乙醇水溶液体积用量以大孔树脂重量计为10ml/g。

8.一种权利要求1所述印迹脂肪酶在催化蔗糖合成蔗糖‑6‑乙酯中的应用。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:将蔗糖、印迹脂肪酶、4A分子筛加入叔戊醇与二甲基亚砜复配的溶剂中,再加入乙酸乙烯酯,混匀,40℃和180 r/min条件下振荡反应16h后,反应液在4000r/min离心10min,取上层清液在真空度0.1个标准大气压下80℃回收溶剂,获得蔗糖‑6‑乙酯。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述蔗糖与乙酸乙烯酯的质量之比为1:2.5;

所述蔗糖与印迹脂肪酶重量比为1:9.7;所述蔗糖与4A分子筛重量比为1:9.7;所述叔戊醇、二甲基亚砜体积用量以蔗糖重量计分别为77.7ml/g和19.4ml/g。