1.一种基于荧光共振能量转移检测生物硫醇的近红外比率荧光探针,其特征在于,荧光探针的结构式如下:
2.一种如权利要求1所述的近红外比率荧光探针的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将氧杂蒽染料1与肌氨酸叔丁酯盐酸盐和卡特缩合剂进行酰胺偶联反应,反应结束后经过后处理得到化合物2;
(2)将氟硼二吡咯3与盐酸胱胺在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺进行酰胺偶联反应,反应结束后经过后处理得到化合物4:(3)步骤(1)得的化合物2在二氯甲烷中酸化后,再与步骤(2)得到的化合物4在EDCI和NHS试剂进行酰胺偶联反应,反应结束后经过后处理得到近红外比率荧光探针。
3.一种如权利要求1所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用。
4.根据权利要求3所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用,其特征在于,所述的生物硫醇为半胱氨酸、同型半胱氨酸或谷胱甘肽。
5.根据权利要求3或4所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用,其特征在于,所述的荧光探针用于生物硫醇的定性检测,具体方法如下:将所述的荧光探针配置成测试溶液,然后加入待测样品,在488nm激发下,测定512nm和
656nm处荧光发射强度变化,若512nm处荧光强度变强,656nm处荧光强度变弱,则确定待测样品中含有生物硫醇。
6.根据权利要求3或4所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用,其特征在于,所述的荧光探针用于生物硫醇的定量检测,具体方法如下:(1)将所述的荧光探针配置成测试溶液,然后加入待测样品,在488nm激发下,测定
512nm和656nm处荧光发射强度;
(2)计算得到荧光强度比值F512nm/F656nm,根据荧光强度比值F512nm/F656nm得到待测样品中的生物硫醇的含量。
7.根据权利要求6所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用,其特征在于,所述测试溶液的配制方法如下:将所述荧光探针加入到EtOH/PBS溶液中,配置成浓度为5μmol/L的测试溶液。
8.根据权利要求3或4所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用,其特征在于,所述的荧光探针用于细胞内荧光成像测试,具体方法如下:将待测细胞用含有荧光探针的溶液进行孵化,然后PBS洗涤三次,进行共聚焦细胞成像检测;
共聚焦细胞成像检测时,激发波长为488nm,绿色通道收集波长为500-550nm,红色通道收集波长为630-680nm。